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Hygromycin B 潮霉素B
Hygromycin B 潮霉素B

所在地：Roche

貨物所在地：上海上海市

更新時間：2024/9/1 21:01:14

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地址：
上海市浦東新區天雄路166弄1號3樓
網址：
www.yeasen.com

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供應簡介
潮霉素B是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑制蛋白質合成而殺死細菌、真菌和高等真核細胞。潮霉素B通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成。目前常用于篩選和維持培養含潮霉素抗性基因的原核或真核細胞。


詳細介紹

 

對潮霉素B的抗性源自編碼潮霉素B磷酸轉移酶（Hph）的基因。至今發現兩種來源： 
2）   由于作用模式的差異，常與G418 （GeneticinTM），Zeocin™和blasticidin S聯合使用，篩選穩定轉染兩個不同載體的細胞株；

雙抗性穩定轉染細胞篩選的抗生素作用機制及抗性
抗生素
抗性機制
抗性基因
哺乳動物篩選濃度
潮霉素B
干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀
Hph
200~500μg/mL
G418
干擾80S核糖體功能和抑制蛋白合成
Tn5/Tn601
100~1000μg/mL
Zeocin
摻入或者切割DNA引起細胞死亡
Sh ble
50~100μg/mL
核糖體上抑制肽鍵形成
Bsd/BSD
3~50μg/mL

4）作為驅蟲藥加入動物飼料； 
哺乳動物細胞·200-500 μg/mL；細菌/植物細胞·100-300 μg/mL；真菌·300-1000μg/mL； 
使用一：殺滅曲線確定*殺死濃度（僅作參考，因個人檢測體系而異）
（1）往組織培養級的96孔板內加入未轉染細胞，細胞密度約50-200細胞/孔；細胞貼壁之后，往每孔加入含不同濃度（如50-1000μg/mL，至少5個濃度）潮霉素B的200μL新鮮培養基；
（2）37℃，5% CO2培養箱孵育細胞10-14天；
（3）培養5-7天后更換新的培養液，培養液內含有相應濃度的潮霉素B；
（4）10-14天后使用細胞增殖方法如MTT，CCK-8等評估細胞活力；也可以通過檢測細胞克隆數或百分比匯合率來確定毒性效應。一般選擇在10-14天能夠殺死所有細胞的zui小濃度為*篩選濃度。
使用二：篩選穩定轉染細胞
（1）         對于貼壁細胞，直接吸去60mm培養皿內的轉染細胞培養基，然后加入含有潮霉素B的新鮮培養基5-6ml；對于懸浮細胞，無菌條件250x g,離心10min除去舊的轉染細胞培養基，然后懸浮在約5ml的含潮霉素B的新鮮培養基；
（2）         5-7天后，如上方法更換含有潮霉素B的新鮮培養基；
（3）         再孵育細胞5-7天；
（4）         10-14天孵育后，培養體系中只含有能夠表達潮霉素B抗性表型的活細胞。因此篩選之后如步驟一，更換不含潮霉素B的新鮮培養基。 
應用實例：

物種
細胞系/株
質粒/載體
篩選濃度
E.Coli
HB101/XL1-Blue/K802
pEX-2
Rice
Protoplast
pTRA132/pTRA141
95~285 μM
Callus
binary vector
50 μg/mL
Aspergillus nidulans
G191/pDJB3-1
pDH25
250 ,＞1000
Chicken
B cell line DT40
HEK293
pUHD10-3
50 μg/mL
Mouse
J1 ES
pBS524
Human
HMEC-1
pCEP-4
200 μg/mL
Drosophila
S2
pAc, pCoHygro
500 μg/mL

保存方法：溶液直接存放在2℃～8℃，至少存放1年。
訂購：

貨號
名稱
產地
規格
報價
*（元）
庫存
10843555001
Hygromycin B 潮霉素B
Roche
1g （20 ml）
1933
980
是

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