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當前位置：> 供求商機> 500 U-Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶
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產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶 | 10615ES76 | 500 U | -20℃ | 1256.00 |
Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶 | 10615ES84 | 2000 U | -20℃ | 3856.00 |
Vaccinia Capping Enzyme牛痘病毒加帽酶 | 10615ES92 | 10000 U | -20℃ | 14856.00 |
產品描述
真核生物中mRNA經轉錄后修飾在5端形成一個特殊結構，即帽子結構，該結構對mRNA的穩定、轉運與翻譯過程均有較重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子結構的有效酶，其由D1和D12兩個亞基組成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鳥苷酰基轉移酶活性和鳥嘌呤甲基轉移酶活性，可將7-甲基鳥嘌呤帽結構（m7Gppp）連接到RNA的5末端（m7Gppp5N）。牛痘病毒加帽酶，在合適濃度的加帽緩沖液（Capping buffer），鳥苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲硫氨酸（SAM）等存在條件下，能夠在一個小時之內對RNA進行加帽，效率可達到*，并且保證正確的方向。
本品以無菌液體形式提供，可應用于體內/體外翻譯前mRNA的加帽反應或mRNA的5末端標記反應。
產品性質
來源（Source） | 攜帶牛痘病毒加帽酶基因的E. coli |
zui適溫度（Optimum Temperature） | 37℃ |
儲存緩沖液（Storage Buffer） | 20 mM Tris-HCl pH 8.0，100 mM NaCl，1 mM DTT，0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100，50%甘油 |
活性單位定義（Unit Definition） | 37℃條件下，1小時內將10 pmol GTP（α- 32 P）摻入到一條含80個核苷酸（80 nt）轉錄產物上所需要的酶量。 |
運輸和保存方法
冰袋運輸，-20℃保存，有效期1年。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作；
2）所提取的RNA需經過純化并使用無核酸酶的水重懸；
3）在加入酶之前需要對RNA溶液進行加熱以去除5末端的二級結構；
4）對于已知5末端結構的RNA，可以延長反應時間至60分鐘，提高加帽效率；
5）5末端標記反應體系中，GTP儲液應稀釋為反應體系中mRNA摩爾濃度的1-3倍。
使用方法
1. 加帽反應
本步驟適用于10 μg RNA（≥ 100 nt）的加帽反應，且可根據實驗需要放大。
1）取10 μg RNA至1.5 mL離心管，使用無核酸酶的水稀釋至15 μL；
2）65℃加熱5分鐘；
3）取出離心管置于冰上5分鐘；
4）依次加入以下組分：
組分 | 體積 |
上述變性的RNA | 15 μL |
10×Capping Buffer | 2.0 μL |
GTP（10 mM） | 1.0 μL |
SAM（2 mM） | 1.0 μL |
Vaccinia Capping Enzyme（10 U/μL） | 1.0 μL |
【注】：10×Capping Buffer配方為：0.5 M Tris-HCl，pH 8.0；50 mM KCl，10 mM MgCl2，10 mM DTT。
5）37°C孵育30分鐘；
6）RNA加帽完成，可進行后續實驗。
2. 5末端標記反應
本步驟適用于5末端帶有三磷酸的RNA標記，且可根據實驗需要放大，其標記效率受反應體系中RNA與GTP摩爾濃度比以及RNA樣本中GTP含量影響。
1）取適量RNA到1.5 mL離心管，使用無核酸酶的水稀釋至14 μL；
2）65℃加熱5分鐘；
3）取出離心管置于冰上5分鐘；
4）依次加入以下組分：
組分 | 體積 |
上述變性的RNA | 14 μL |
10×Capping Buffer | 2.0 μL |
GTP mix | 2.0 μL |
SAM（2 mM） | 1.0 μL |
Vaccinia Capping Enzyme（10 U/μL） | 1.0 μL |
【注】：GTP mix為GTP和少量標記物，其中GTP使用濃度參照注意事項5）。
5）37°C孵育30分鐘；
6）RNA 5末端標記完成，可進行后續實驗。
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