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產品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產業(yè) |
|---|
產品介紹
產品簡介
Hifair® Lyo Multiplex One Step RT-qPCR Kit是以 RNA 為模板進行多重定量 PCR 反應的試劑盒。在實驗的過程中，逆轉錄和定量 PCR 在同一反應管中進行，簡化了實驗操作，降低了污染的風險。Buffer和酶的設計，可用于一步法 RT-qPCR 凍干反應體系的配制和產品設計。
本試劑盒利用耐熱 Hifair® V Reverse Transcriptase 高效合成第一鏈 cDNA，并利用 UNICON® HotStart Taq DNA
Polymerase 進行定量擴增。本試劑盒主要包含優(yōu)化的凍干 Buffer，Enzymes Mix 等，并添加了有效抑制非特異性 PCR 擴
增的因子和提升多重 qPCR 反應擴增效率的因子，能夠在保證引物擴增效率的同時，進行多重熒光定量擴增反應。
本試劑盒中匹配了凍干保護劑，可以用于凍干。
產品信息
貨號 | 11831ES60 / 11831ES80 / 11831ES92 |
規(guī)格 | 100 T / 1000 T / 10000 T |
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 11831ES60(100 T) | 11831ES80(1000 T) | 11831ES92(10000 T) |
11831-A | 4×Hifair® Lyo-Buffer | 600 μL | 6 mL | 60 mL |
11831-B | Hifair® Lyo-Enzyme Mix | 100 μL | 1 mL | 10 mL |
11831-C | 凍干保護劑 | 800 μL | 8 mL | 80 mL |
【注】1) 4×Hifair® Lyo-Buffer 為 Lyo Multiplex One Step RT-qPCR kit 的簡寫。
2) Hifair® Lyo-Enzyme Mix 主要包含有耐熱 Hifair® V Reverse Transcriptase 和 UNICON® HotStart Taq DNA Polymerase。
運輸條件
1. 保存方式：
Part 1： 11831-A【 4×Hifair® Lyo-Buffer 】、11831-C【 凍干保護劑 】，-25~-15℃ 保存，有效期 1 年。
Part 2： 11831-B【 Hifair® Lyo-Enzyme Mix 】，2~8℃ 保存，有效期 6 個月。
運輸方式：冰袋運輸。
使用方法
反應體系（以25uL體系為例）
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
4×Hifair® Lyo-Buffer | 6 | 1x |
Hifair® Lyo-Enzyme Mix | 1 | - |
凍干保護劑 | 8 | - |
Primer Mix(10μM) | 1 | 0.1-1 uM |
Probe Mix(10μM) | 0.5 | 0.05-0.5 uM |
模板RNA | 5 | - |
DEPC H20 | up to 25 | - |
參考擴增程序
1）常規(guī)擴增程序
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 |
逆轉錄 | 50℃a | 10 min | 1 |
預變性 | 95℃ | 5 min | 1 |
擴增反應 | 95℃ |
| 45 |
60℃b | 30 secc |
2）快速擴增程序
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數 |
逆轉錄 | 50℃a | 2 min | 1 |
預變性 | 95℃ | 2 sec | 1 |
擴增反應 | 95℃ |
| 45 |
60℃b | 13 secc |
【注】a. 逆轉錄：42℃或者50℃均可。
b. 擴增反應：擴增反應溫度根據設計的引物Tm值進行調整。
c. 熒光信號采集：不同的qPCR檢測儀器所需的熒光信號采集時間不同，請根據最短時間限制進行設置。
適用機型
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™，ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex；
Stratagene MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™；
Bio-Rad CFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™；
Eppendorf Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen Corbett Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene® 6000；
Roche Applied Science LightCycler® 480, LightCycler® 2.0; Lightcycler® 96；
Thermo Scientific PikoReal Cycler; Cepheid SmartCycler®; Illumina Eco qPCR
注意事項
1. 實驗過程中請使用RNase free耗材。
2. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
