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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
初級會員·12年
12592ESHieff NGS® Multi-CUT&Tag Library Prep Kit
| 參考價 | ￥3200 |
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
- 12592ES 型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
規(guī)格
| 4 T | 3200元 | 10 件 可售 |
訪問次數(shù)：244更新時間：2023-11-19 20:55:49
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- www.yeasen.com
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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
|---|
產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品簡介
Hieff NGS® Multi-CUT&Tag Library Prep Kit for Illumina®是針對Illumina®高通量測序平臺研發(fā)的用于Multi-CUT&Tag實驗的文庫構(gòu)建試劑盒，適用于100-100,000個細(xì)胞起始量的樣本建庫。Multi-CUT&Tag是研究蛋白與DNA互作的技術(shù)，相較于傳統(tǒng)的CUT&Tag，該技術(shù)使用nanobody-Tn5（Anti-mouse Tn5和Anti-rabbit Tn5），可實現(xiàn)一份細(xì)胞，兩種靶標(biāo)的研究，同時，該技術(shù)實驗中無需再添加二抗。該技術(shù)具有一抗抗體投入量更少、無需二抗、文庫產(chǎn)量更高等優(yōu)點。經(jīng)過細(xì)胞捕獲、一抗孵育、轉(zhuǎn)座酶孵育、轉(zhuǎn)座酶激活、摻入DNA標(biāo)準(zhǔn)品、細(xì)胞裂解、磁珠回收gDNA、文庫擴增和磁珠分選等步驟，靶蛋白結(jié)合的DNA片段最終轉(zhuǎn)化為適用于Illumina®平臺測序的文庫。
本試劑盒包含兩個獨立模塊：BOX-I和BOX-II。BOX-I的核心為結(jié)合細(xì)胞的ConA磁珠和回收DNA的磁珠，BOX-II包含細(xì)胞透化劑、蛋白酶抑制劑、抗體結(jié)合buffer、轉(zhuǎn)座酶結(jié)合buffer、蛋白酶K以及后續(xù)文庫擴增所需的所有試劑。此外，本試劑盒已在不同種類細(xì)胞（如293T、K562、CHO、ESC細(xì)胞等）和動物組織（腦組織、肝臟、脾等）中進(jìn)行了驗證，均具有良好的建庫效率和建庫產(chǎn)量。本試劑盒提供的所有試劑都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制和功能驗證，上保證了文庫的穩(wěn)定性和重復(fù)性。
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 |
Hieff NGS® Multi-CUT&Tag Library Prep Kit for Illumina® | 12592ES04 | 4 T |
12592ES12 | 12 T | |
12592ES48 | 48 T |
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 12592ES04 | 12592ES12 | 12592ES48 | ||
BOX-I | 12592-A |
| ConA Beads | 40 μL | 120 μL | 480 μL |
12592-B |
| DNA Selection Beads | 840 μL | 2.52 mL | 10.08 mL | |
12592-C |
| Cell wash buffer | 3.6 mL | 10.8 mL | 43.2 mL | |
12592-D |
| ConA bind buffer | 400 μL | 1.2 mL | 4.8 mL | |
BOX-II | 12592-E |
| Protease Inhibitor Cocktail (EDTA-free) | 40 μL | 120 μL | 480 μL |
12592-F |
| 5% Digitonin | 8 μL | 24 μL | 96 μL | |
12592-G |
| 3 M NaCl | 120 μL | 360 μL | 1440 μL | |
12592-H |
| 50x Protein blocker | 4 μL | 12 μL | 48 μL | |
12592-I |
| Anti-mouse Tn5 | 8 μL | 24 μL | 96 μL | |
12592-J |
| Anti-rabbit Tn5 | 8 μL | 24 μL | 96 μL | |
12592-K |
| 30x Activating buffer | 4 μL | 12 μL | 48 μL | |
12592-L |
| 15x Terminate Solution | 8 μL | 24 μL | 96 μL | |
12592-M |
| DNA Spike-in mix V2 (5 pg/uL) | 4 μL | 12 μL | 48 μL | |
12592-N |
| 30x Proteinase K | 4 μL | 12 μL | 48 μL | |
12592-O |
| 2×Ultima Amplification Mix | 100 μL | 300 μL | 1.2 mL | |
12592-P |
| i5 Universal Primer | 8 μL | * | * | |
12592-Q |
| i7 Index Primer (T701) | 8 μL | * | * | |
【注】：*12592ES12/48試劑盒不含Index Primer，需搭配Cat#12417進(jìn)行完整建庫；
*12592ES04中，index信息為i5 index GCCTTAT（對應(yīng)mouse來源抗體數(shù)據(jù)）、AGGATAT（對應(yīng)mouse來源抗體數(shù)據(jù)）、i7 index TAAGGCGA。
儲存條件
BOX-I：2-8℃保存，BOX-II：-25~-15℃保存，有效期1年。
使用說明
一、自備材料
1. 抗體：靶蛋白的一抗（鼠源或者兔源）。
2. 文庫質(zhì)檢：Agilent 2100 Bioanalyzer DNA 1000 Chip/ High Sensitivity Chip或其他等效產(chǎn)品、文庫定量試劑。
3. 其他材料：無水乙醇、無菌超純水、低吸附槍頭、PCR管、磁力架、PCR儀等。
4. 接頭：Hieff NGS® Tagment Index Kit for Multi-CUT&Tag（Cat#12417）。
二、細(xì)胞準(zhǔn)備
1. 在室溫條件下收集細(xì)胞并計數(shù)，死亡的細(xì)胞染色質(zhì)松散，暴露出大量的裸DNA，轉(zhuǎn)座酶復(fù)合物隨機切割會造成比較強的噪音信號，建議樣本細(xì)胞活性不低于80% (細(xì)胞活性可以用臺盼藍(lán)染色來鑒定)。
2. 貼壁較緊的細(xì)胞如Hela細(xì)胞等可用Accutase或者Trypsin部分消化獲得。
3. 植物或真菌細(xì)胞可通過特殊處理獲得原生質(zhì)體或細(xì)胞核進(jìn)行實驗，方法可參考附錄。
4. 新鮮或者凍存的動物組織可通過特殊處理獲得細(xì)胞/細(xì)胞核懸液進(jìn)行實驗，方法可參考附錄。
三、操作原理及實驗流程圖
實驗原理：利用Con A磁珠捕獲細(xì)胞并利用5% Digitonin對細(xì)胞膜進(jìn)行穿孔，選擇鼠源一抗和兔源一抗實現(xiàn)同一細(xì)胞雙靶標(biāo)研究。之后，鼠源一抗結(jié)合Anti-mouse Tn5、兔源一抗結(jié)合Anti-rabbit Tn5從而定向切割不同靶標(biāo)結(jié)合的DNA序列，再經(jīng)過一步法PCR完成二代測序文庫的構(gòu)建。對文庫進(jìn)行測序后的數(shù)據(jù)進(jìn)行barcode拆分，即可獲得雙靶標(biāo)的高分辨率靶蛋白結(jié)合的染色質(zhì)圖譜。
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