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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 醫療衛生,生物產業,制藥 |
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產品介紹
產品簡介
本產品采用DH5α菌株經特殊工藝處理得到得感受態細胞，可用于DNA的化學轉化，廣泛適用于高效的DNA克隆和質粒擴增，能保證高拷貝質粒的穩定遺傳，適用于藍白斑篩選。DH5α細胞重組酶recA1和核酸內切酶endA1基因缺失突變使其能保證克隆DNA的穩定性。F-DH5α感受態細胞經特殊工藝制作，無需42℃熱激，37℃孵育，只需10 min即可完成一次轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率約達108 cfu/μg DNA。
DH5α細胞基因型：F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44λ- thi -1 gyrA96 relA1phoA
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 11803ES80 |
11803-A | F-DH5α 感受態細胞 | 10×100 μL |
11803-B | pUC19 (control vector, 10 pg/μL) | 10 μL |
儲存條件
-85℃~-65℃保存，有效期6個月。請勿將本品置于-20℃或液氮中保存。
使用方法
快速轉化操作方法（10 min）
1）提前15分鐘將用到的篩選培養基平板拿到37℃預熱。
2）將F-DH5α感受態細胞從-80℃拿出迅速插入冰上，待菌體融化，加入目的DNA（質粒或連接產物），輕輕彈勻，冰浴靜置5 min。
*所加DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。
3）用200 μL移液槍將上一步的混合物轉移到已經37℃預熱的LB培養基上，均勻涂布。
4）將平板置于37℃培養箱倒置過夜培養。若進行藍白斑篩選操作，平板在37℃至少倒置培養15 h。
快速熱激轉化操作方法（25 min，可提高轉化效率）
1）將F-DH5α感受態細胞從-80℃拿出迅速插入冰上，待菌體融化，加入目的DNA（質粒或連接產物），輕輕彈勻，冰浴靜置5 min。
*所加DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。
2）42℃水浴熱激45 sec，迅速插回冰上靜置2 min，此過程不要晃動。加入700 μL不含抗生素的LB，37℃，200 rpm復蘇10分鐘，均勻涂板。
3）將平板置于37℃培養箱倒置過夜培養。若進行藍白斑篩選操作，平板在37℃至少倒置培養15 h。
常規熱激轉化操作方法
1）將F-DH5α感受態細胞從-80℃拿出迅速插入冰上，冰浴、解凍（大約5 min）。
2）立即向解凍后的感受態細胞懸液中加入目的DNA，輕輕彈勻，冰浴靜置25 min。
*所加DNA體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一。
3）42℃水浴中熱激45 sec，然后快速將EP管轉移到冰上，靜置2 min。
*此過程不要晃動，否則會降低轉化效率。
4）向離心管中加入700 μL左右不含抗生素的LB或2YT培養基，混勻后37℃，200 rpm復蘇60 min。
5）5,000 rpm離心1 min收集菌體，留取100 μL左右上清涂布至含有相應抗生素的培養板上，37℃培養過夜。如進行藍白斑篩選操作，請將平板放 37℃培養至少15 h。
注意事項
1. 本產品不可反復凍融，以免降低感受態細胞的轉化效率。
2. 本產品在冰中解凍時間不宜過長，感受態細胞剛化凍時轉化效率高。
3. 加入質粒應輕柔操作。
4. F-DH5α感受態細胞既可以快速轉化也可以常規熱激轉化，對于>7 kb質粒的構建，為提高轉化效率，可采用常規轉化方式進行轉化。
5. F-DH5α感受態細胞涂氨芐/羧芐抗性平板時效率較高，若涂或其他抗生素平板，轉化效率下降（無孵育步驟，等對菌體毒性較大）。若要提高或其他抗性質粒的轉化效率，可增加孵育步驟。
6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
7. 本產品僅作科研用途！
