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產品簡介
| 供貨周期 | 兩周 | 應用領域 | 醫療衛生,制藥 |
|---|
產品介紹
產品簡介
Dickkopf相關蛋白1（DKK-1）屬于Dickkopf家族的成員。其成員大多具有抑制Wnt信號通路，在脊椎動物發育過程起重要作用，也與骨形成，腫瘤和阿爾茲海默癥有關。DKK-1是一種分泌蛋白，其與Wnt受體LRP5/6及另一類穿膜蛋白Kremen1/2結合，形成三聚體，誘導快速的細胞內吞，減少細胞膜上的LRP5/6，由此阻斷了Wnt信號向胞內的傳遞。DKK1的表達水平與骨髓源性抑制細胞（MDSCs）的浸潤水平正相關，同時其與骨病，風濕病等的關聯，使其稱為臨床研究的重要靶點。
翌圣Human DKK-1 ELISA(酶聯免疫吸附測定)試劑盒是一種體外酶聯免疫吸附測定試劑盒，用于定量測定血清、血漿和細胞培養上清中的DKK-1。特異性抗DKK-1抗體預包被在高親和力的酶標板上。酶標板孔中加入標準品、待測樣本，經過孵育，樣本中存在的DKK-1與固相抗體結合。洗滌去除未結合的物質后，加入檢測抗體孵育結合，經洗滌，再加入酶結合物(Streptavidin-HRP)孵育結合。洗滌后，加入顯色底物 TMB，避光顯色。顏色反應的深淺與樣本中DKK-1的濃度成正比。加入終止液終止反應，在450 nm 波長(參考波長570 - 630 nm)測定吸光度值。
產品信息
貨號 | 97014ES48 / 97014ES96 |
規格 | 48 T / 96 T |
檢測范圍 | 31.25-2000 pg/mL |
檢測方法 | 雙抗夾心法 |
檢測時長 | 4.5小時 |
靈敏度 | 19.2 pg/mL |
稀釋線性 | 77 - 121% |
回收率 | 77 - 122% |
板內差 | 5.1% |
板間差 | 6.7% |
標曲制定
計算標準品和樣本復孔的平均OD值，并減去空白孔的平均OD值作為校準OD值。以標準品濃度的對數為橫坐標，校準OD值的對數為縱坐標繪制標準曲線。多種繪圖和統計學軟件可以用于輔助繪制標準曲線并進行未知樣本濃度的計算。四參數擬合法往往擬合效果較好，其它方法如線性擬合也可能獲得較好擬合結果，需要根據具體實驗數據進行分析。
實驗數據
標曲數據
數據擬合繪制標準曲線，生成的標曲用于實驗數據分析。
靈敏度檢測
DKK-1的檢測限為19.2 pg/mL，通過使用重復檢測20次零孔OD值的均值與標準差計算得出。
精密度檢測
酶標板內精密度
3個已知濃度的樣本酶標板內重復測定6次，評估酶標板內的精密度。
酶標板間精密度
3個已知濃度的樣本酶標板間重復檢測30次，評估酶標板間的精密度。
項目 | 板內精密度 | 板間精密度 | ||||
樣本 | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
6 | 6 | 6 | 22 | 22 | 22 | |
平均值 | 968.56 | 247.11 | 71.97 | 988.44 | 261.31 | 68.73 |
標準差 | 32.00 | 12.95 | 4.83 | 48.74 | 22.34 | 4.70 |
變異系數（%） | 3.3 | 5.2 | 6.7 | 4.9 | 8.5 | 6.8 |
回收率檢測
通過不同水平的DKK-1添加于樣本中來測定回收率，其回收率如下:
樣本類型 | 平均回收率(%) | 范圍（%） |
血清 | 89.3 | 81.7-101.5 |
血漿 | 82.9 | 77.3-87.7 |
細胞培養上清 | 101.7 | 77.8-122.1 |
稀釋線性檢測
血清稀釋比例 | 平均期望值(%) | 范圍（%） |
1:02 | 86.6 | 79.3-92.5 |
1:04 | 89.5 | 80.2-98.2 |
1:08 | 88.7 | 79.9-96.5 |
1:16 | 92.9 | 84.5-102.4 |
血漿稀釋比例 | 平均期望值(%) | 范圍（%） |
1:02 | 89.3 | 83.5-97.0 |
1:04 | 93.4 | 81.6-99.9 |
1:08 | 104.6 | 83.4-121.2 |
1:16 | 101.8 | 77.2-114.6 |
細胞培養上清稀釋比例 | 平均期望值(%) | 范圍（%） |
1:02 | 99.0 | 81.4-112.2 |
1:04 | 100.4 | 86.0-111.8 |
1:08 | 103.3 | 83.5-118.4 |
1:16 | 100.1 | 79.6-112.9 |
樣本值
應用本試劑盒，檢測若干健康志愿者的樣本，志愿者的用藥史不詳。
樣本類型 | 樣本數目 | 平均值（pg/mL） | 樣本值（pg/mL） |
血清 | 10 | n.d. | n.d. |
血漿 | 8 | 569.8 | 391.5-1059.8 |
細胞培養上清 | 4 | 365.5 | 168.4-414.3 |
n.d. 指樣本濃度值低于檢測范圍內得15.63 pg/mL
測定特異性
本試劑盒識別天然和重組DKK-1，沒有觀察到明顯的交叉反應和干擾影響。
Recombinant human: |
Cerberus |
Dkk-2 |
Dkk-3 |
Dkk-4 |
Kremen-1 |
Kremen-2 |
Soggy-1 |
檢測簡圖
疑問解答
問題 | 造成原因 | 解決方法 |
標曲不好 | 移液量不準確 | 檢查移液器，按時校準，仔細操作，充分混勻時蓋緊管口并盡量避免泡沫。 |
稀釋方法不恰當 | ||
顯色值偏低 | 孵育時間太短 | 給予足夠的孵育時間，樣本和溶解的標準品隔夜后更換。 |
移液量不足或稀釋不當 | 校準移液器和規范操作 | |
CV偏高 | 酶標板清洗不當 | 使用正確的洗滌工序；如果使用洗板機，檢查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 | 準備新鮮洗液 | |
靈敏度較低 | 試劑盒儲存不當 | 按照產品組分表進行保存。 |
