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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 制藥,綜合 |
|---|
產品介紹
產品簡介
Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix (UDG plus)是2×Mix預混合試劑，能夠實現在單個反應孔中進行多達四重的熒光定量PCR反應。本產品含有基因改造的抗體法熱啟動Taq酶，極大地提高了擴增靈敏度和特異性。同時，本產品對多重反應緩沖體系進行了深度優化，能夠提高反應的擴增效率，促進低濃度模板的有效擴增。本產品可用于基因分型和基因多重定量分析。本產品含有UDG酶，可有效防止氣溶膠污染的風險。
產品信息
貨號 | 11212ES03/ 11212ES08 / 11212ES12 / 11212ES13/ 11212ES60/ 11212ES62 |
規格 | 1 mL /5×1 mL / 12.5 mL /1×12.5 mL /20×5 mL /125 mL |
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 11212ES03 (1 mL) | 11212ES08 (5×1 mL) | 11212ES12 (12.5 mL) | 11212ES13 (1×12.5 mL) | 11212ES60 (20×5 mL) | 11212ES62 (125 mL) |
11212 | 2×TaqMan qPCR Mix | 1 mL | 5×1 mL | 12.5 mL | 1×12.5 mL | 20×5 mL | 125 mL |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期18個月。
使用說明
反應體系******
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
2×TaqMan qPCR Mix | 12.5 | 1× |
Primer Mix (10 μM) | x | 0.1-0.5 μM* |
Probe Mix (10 μM) | x | 50-250 nM** |
Rox reference dye*** | 0.5 | 1× |
模板**** | 1-10 | - |
ddH2O | up to 25***** | - |
*引物濃度：Primer Mix中包含多對引物，通常每條引物終濃度為0.2 μM，也可以根據情況在0.1-0.5 μM間進行調整。
**探針濃度：Probe Mix中包含多條不同熒光信號的探針，每條探針的濃度可根據具體情況在50-250 nM間調整。
***Rox reference dye：使用在Applied Biosystems 等Real Time PCR 擴增儀上，用以校正孔與孔之間產生的熒光信號誤差；本產品不含Rox reference dye。如需，推薦使用貨號10200ES產品。
****模板稀釋：qPCR靈敏度，建議將模板進行稀釋使用。若模板為cDNA原液，則模板體積不超過總體積的1/10。
*****反應體系：推薦使用25 μL、30 μL或50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
******體系配制：請于超凈工作臺內配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。使用前務必充分混勻，避免劇烈震蕩產生過多氣泡。
參考擴增程序
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
污染消化 | 25℃ | 10 min | 1 |
預變性 | 95℃ | 5 min | 1 |
變性 | 95℃ |
| 45 |
退火/延伸* | 60℃ | 30 sec** |
*退火/延伸：溫度和時間可根據實驗要求適當調整。
**熒光信號采集：請按照儀器使用說明書要求進行實驗程序設置，幾種常見儀器的時間設定如下：
20 sec：Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sec：Applied Biosystems 7300
32 sec：Applied Biosystems 7500
適用機型
Applied Biosystems: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne™, StepOne Plus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 and 5, QuantStudio™ 6,7,12k Flex;
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
Stratagene: MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler; Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.
注意事項
1.關于操作
1）請于使用前確保產品解凍并混勻，短暫離心收集至管底后，置于冰上備用。
2）為避免樣品間交叉污染和氣溶膠污染，推薦在超凈臺中進行反應體系的配制。
3）使用過程中避免產品的反復凍融。
4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2. 實驗方法
1）引物設計
a. 引物必須具有特異性。
b. 引物的Tm值必須在58-60°C，而且各組引物的Tm差異應控制在1-2°C。
c. 引物的長度一般控制在15-30 bp之間。
2）探針設計
a. TaqMan探針的Tm值要比對應的引物高約10°C（68-70°C）。
b. TaqMan探針和引物間不能形成二聚體。
Ver.CN20230707
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