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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1ml |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 10666ES03 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
10×Capping Buffer GMP-grade | 10666ES03 | 1 mL | 150 |
10666ES10 | 10 mL | 650 |
產品描述
真核生物中mRNA經轉錄后修飾在5'端形成一個特殊結構，即帽子結構，該結構對mRNA的穩定、轉運與翻譯過程均有較重要作用。牛痘病毒加帽酶是催化形成帽子結構的有效酶，其由D1和D12兩個亞基組成，兼具RNA三磷酸酯酶活性、鳥苷酰基轉移酶活性和鳥|嘌|呤甲基轉移酶活性，可將7-甲基鳥|嘌|呤帽結構（m7Gppp）連接到RNA的5'末端（m7Gppp5'N）。牛痘病毒加帽酶，在合適濃度的加帽緩沖液（Capping buffer），鳥苷三磷酸（GTP），S-腺苷甲|硫|氨|酸（SAM）等存在條件下，能夠在一個小時之內對RNA進行加帽，并且保證正確的方向。
Capping Buffer 牛痘病毒加帽酶加帽緩沖液是經過優化后的10×Capping Buffer，按照GMP工藝要求生產，產品以無菌液體形式提供，可應用于體內/體外翻譯前mRNA的加帽反應或mRNA的5'末端標記反應。
產品性質
pH | 8.0±0.2 |
核酸外切酶（Exonuclease Activity） | 陰性 |
切口酶（Endonuclease Activity） | 陰性 |
RNA酶（RNase Activity） | 陰性 |
無菌檢查（Sterility） | 無菌生長 |
【注】：具體產品質檢數據及更多指標請查看批次質檢報告。
運輸和保存方法
冰袋運輸，-20℃保存，有效期1年。
注意事項
1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作；
2. 所提取的RNA需經過純化并使用無核酸酶的水重懸；
3. 在加入酶之前需要對RNA溶液進行加熱以去除5'末端的二級結構；
4. 對于已知5'末端結構的RNA，可以延長反應時間至60 min，提高加帽效率；
5. 5'末端標記反應體系中，GTP儲液應稀釋為反應體系中mRNA摩爾濃度的1-3倍。
Capping Buffer 牛痘病毒加帽酶加帽緩沖液
使用方法
1. 加帽反應（反應體系20 μL）
本步驟適用于10 μg RNA（≥ 100 nt）的加帽反應，且可根據實驗需要放大。
1）取10 μg RNA至1.5 mL離心管，使用無核酸酶的水稀釋至15 μL；
2）65℃加熱5 min；
3）取出離心管置于冰上5 min；
4）依次加入以下組分：
組分 | 體積 |
上述變性的RNA | 15 μL |
10×Capping Buffer | 2.0 μL |
GTP（10mM） | 1.0 μL |
SAM（2mM） | 1.0 μL |
Vaccinia Capping Enzyme（10 U/μL） | 1.0 μL |
【注】：10×Capping Buffer配方為：0.5 M Tris-HCl，pH 8.0，50 mM KCl，10 mM MgCl2，10 mM DTT。
5）37°C孵育30 min；
6）RNA加帽完成，可進行后續實驗。
2. 5'末端標記反應（反應體系20μL）
本步驟適用于5'末端帶有三磷酸的RNA標記，且可根據實驗需要放大，其標記效率受反應體系中RNA與GTP摩爾濃度比以及RNA樣本中GTP含量影響。
1）取適量RNA到1.5 mL離心管，使用無核酸酶的水稀釋至14 μL；
2）65℃加熱5 min；
3）取出離心管置于冰上5 min；
4）依次加入以下組分：
組分 | 體積 |
上述變性的RNA | 14.0 μL |
10×Capping Buffer | 2.0 μL |
GTP mix | 2.0 μL |
SAM（2mM） | 1.0 μL |
Vaccinia Capping Enzyme（10 U/μL） | 1.0 μL |
【注】：GTP mix為GTP和少量標記物，其中GTP使用濃度參照注意事項5）。
5）37°C孵育30 min；
6）RNA 5'末端標記完成，可進行后續實驗。
HB220316
