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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 150T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 15049ES60 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱
產品編號
規格
價格（元）
FastCut BglII快速限制性內切酶
15049ES60
100 T
165.00
產品描述
FastCut BglII快速限制性內切酶是通過基因工程重組技術，可在5~15 min內精確完成DNA切割的快速限制性內切酶，適用于快速切割質粒DNA、PCR產物、基因組DNA等。FastCut™系列快速內切酶共用一種酶切緩沖液，從而簡化了酶切反應體系，另外，有良好的酶活冗余度，可輕松處理底物過量或困難模板的酶切。
產品組分
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20°C保存，有效期2年。
識別位置
5'-A↓GATCT-3'
3'-TCTAG↑A-5'
推薦反應條件
1× FastCut™ 緩沖液；
37°C孵育。
失活條件
80°C孵育20 min。
注意事項
1）3 h孵育未表現星號活性，延時酶切可能出現星號活性；
2）受EcoBI甲基化影響，序列可能重疊，剪切受阻；
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作；
4）本產品僅作科研用途！
質量控制
1. 功能活性檢測：最適反應溫度下，在20 μL反應體系中，1 μL酶能夠在15 min內*消化1 μg λDNA。
2. 超長時間孵育檢測：最適反應溫度下，將1 μL酶與1 μg λDNA共孵育3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解，但延長孵育時間可能出現星號活性。
3. 酶切-連接-再酶切檢測：最適反應溫度下，使用1 μL酶消化底物，回收酶切產物，在22°C下使用適量T4 DNA連接酶可以將酶切產物重新連接，將連接產物再次回收后，使用相同的內切酶可以重新切開連接產物。
4. 非特異性內切酶活性檢測：最適反應溫度下，將1 μL酶與1 μg超螺旋質粒DNA共同孵育4 h后，使用瓊脂糖凝膠電泳檢測，質粒DNA仍然處于超螺旋狀態。
5. 藍白斑檢測：將含有單一lacZα基因的載體以1 μL酶消化，重新連接后轉化入大腸桿菌感受態細胞，涂布在含有對應抗生素、IPTG和X-gal的LB培養基平板上。連接正確的產物會生長出藍色菌落，而連接錯誤（即DNA末端切口不完整）的產物將得到白色菌落。對于FastCut™系列限制酶而言，白色菌落比例應小于1%。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1）按如下建議的加樣順序配制體系反應液（冰上操作）：
組分
質粒DNA
PCR產物
基因組DNA
ddH2O
15 μL
16 μL
30 μL
10×FastCut™ Buffer或10×FastCut™ Color Buffer
2 μL
3 μL*
5 μL
底物DNA
2 μL（~1 μg）
10 μL (~0.2 μg)
10 μL (5 μg)
FastCut™ BglII
1 μL
1 μL
5 μL
Total
20 μL
30 μL
50 μL
*本體系指已純化后的PCR產物。未純化的PCR產物具備一定的離子強度，10×FastCut TM Buffer加入量可適當減少至2 μL。若下一步進行克隆等實驗，酶切前需純化PCR產物。
2）輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴。
3）37°C孵育15 min（質粒），或15~30 min（PCR 產物），或30~60 min（基因組 DNA）。
4）80°C溫育 20 min 即可使酶失活，停止反應（可選）。
2. 雙酶切或多酶切
1）每種內切酶的用量為1 μL，并根據需要適當擴大反應體系。
2）所有內切酶的體積總和不得超過總反應體系的1/10。
3）如果選用的幾種內切酶的最適反應溫度不同，應先以最適溫度低的酶開始酶切，再添加最適溫度較高的酶，以較高的溫度進行孵育。
3.質粒的擴大反應體系
組分
體積（20 μL）
體積（20 μL）
體積（50 μL）
DNA
1 μg
2 μg
5 μg
FastCut™ BglII
1 μL
2 μL
5 μL
10×FastCut™ Buffer或10×FastCut™ Color Buffer
2 μL
2 μL
5 μL
Total
20 μL
20 μL
50 μL
【注】：如果總反應體系大于20 μL，可使用水浴、金屬浴或沙浴，并增加孵育時間。
不同DNA中的識別位點數
λDNA
ΦX174
pBR322
pUC57
pUC18/19
SV40
M13mp18/19
Adeno2
6
0
0
0
0
0
1
11
甲基化修飾影響
Dam
Dcm
CpG
EcoKI
EcoBI
無影響
無影響
無影響
無影響
序列可能重疊
剪切受阻
不同反應緩沖液中的活性
反應緩沖液
FastCut™
Buffer
Thermo Scientific
FastDigest Buffer
NEB
CutSmart® Buffer
Takara
QuickCut™ Buffer
活性
100%
100%
100%
50%
【注】：活性數據來自翌圣生物限制酶標準反應體系下的檢測。
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