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- 40743ES50 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù):451更新時間:2022-02-10 14:57:53
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50ul |
---|---|---|---|
貨號 | 40743ES50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱
產(chǎn)品編號
規(guī)格
價格(元)
MitoTracker®Deep Red FM 線粒體深紅色熒光探針
40743ES50
50 µg
425.00
產(chǎn)品描述
MitoTracker® Deep Red FM是一種細(xì)胞滲透型的carbocyanine-based的深紅外紅色熒光探針(Ex=644 nm,Em=665 nm),包含標(biāo)記線粒體的弱巰基反應(yīng)性的氯甲基官能團(tuán),只需簡單孵育細(xì)胞,即可被動運輸穿過細(xì)胞膜并直接聚集在活性線粒體上。一旦線粒體被染色后,還能根據(jù)后續(xù)實驗的需求進(jìn)行固定(醛類固定劑如甲醛)和透化(醛類去污劑如Triton X-100),探針依然維持在細(xì)胞內(nèi)。本品適合雙標(biāo)實驗,因其紅色熒光與其他的綠色熒光探針具有良好的分辨率。
雖然傳統(tǒng)的線粒體熒光探針如TMR和羅丹明123,也能很容易的聚集在功能線粒體上,但是一旦線粒體膜電位喪失即會被洗掉,從而在一些需要細(xì)胞進(jìn)行醛類固定或者包含線粒體能量狀態(tài)影響因子的實驗中,使其應(yīng)用大受限制。
產(chǎn)品性質(zhì)
CAS號(CAS NO.)
N/A
分子式(Formula)
C34H36Cl2N2
分子量(Molecular weight)
543.58
外觀(Appearance)
Blue solid
激發(fā)波長(Ex)
644 nm
發(fā)射波長(Em)
665 nm
結(jié)構(gòu)式(Structure)
運輸和保存方法
室溫運輸;-20℃避光干燥保存,有效期1年。
使用方法
1. 儲存液的配制
本品是以粉末形式提供,使用前需將本品回溫至室溫。
之后使用細(xì)胞培養(yǎng)級別的無水DMSO(如Yeasen,貨號:60313ES60)將其充分溶解至終濃度1 mM。
本品M. Wt.= 543.58 g/mol,換算下來,50 µg粉末只需加入92 µL DMSO即可得到1 mM儲存液。
可根據(jù)單次的使用量將儲存液分裝后放到-20℃避光,避免反復(fù)凍融。
2. 工作液的配
根據(jù)不同的實驗?zāi)康氖褂貌煌奶结槤舛?,以下的起始操作條件僅作參考,可根據(jù)細(xì)胞類型和其他的相關(guān)因素如細(xì)胞或組織的透化等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。
用適當(dāng)?shù)木彌_液或者細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋1 mM儲存液至工作液濃度。一般推薦使用濃度為25-500 nM。對于后續(xù)需要做固定或透化的樣本,推薦工作濃度為100-500 nM,為了降低過度加載導(dǎo)致的潛在偽影和線粒體毒性,在不影響實驗結(jié)果的前提下應(yīng)盡可能低濃度染色。另外,濃度過高也可能對其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行染色。
3. 染色及檢測
1)貼壁細(xì)胞的染色
培養(yǎng)皿/板內(nèi)加入適量的培養(yǎng)基覆蓋蓋玻片進(jìn)行爬片培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞長至所需豐度,吸除培養(yǎng)液,加入37℃預(yù)熱的MitoTracker® Deep Red FM染色工作液。在所使用細(xì)胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min(最佳孵育時間需優(yōu)化)。染色結(jié)束后,使用新鮮培養(yǎng)液或緩沖液替換上述染色液,即可將其置于熒光顯微鏡下觀察或熒光酶標(biāo)儀下讀數(shù)。或者進(jìn)行后續(xù)的固定和透化步驟,見步驟4。
2)懸浮細(xì)胞的染色
離心收集細(xì)胞,吸除上清,利用37℃預(yù)熱的MitoTracker® Deep Red FM染色工作液輕輕重懸細(xì)胞。在所使用細(xì)胞正常培養(yǎng)條件下孵育15-45 min(最佳孵育時間需優(yōu)化)。染色結(jié)束后,離心收集細(xì)胞,利用37℃預(yù)熱的新鮮培養(yǎng)液或緩沖液重懸細(xì)胞,被染色的細(xì)胞可用流式細(xì)胞儀、熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡進(jìn)行分析。
如果需要蓋玻片上固定化的細(xì)胞,那么可在鋪片前先用多聚賴氨酸(poly-D-lysine)包被載玻片或蓋玻片。
或者進(jìn)行后續(xù)的固定和透化步驟,見步驟4。
4. 固定和透化
1)染色結(jié)束后,利用培養(yǎng)液或緩沖液清洗細(xì)胞;
2)小心吸走清洗液。換用新鮮配制且預(yù)熱的含2-4%甲醛的緩沖液或培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞固定。
3)清洗細(xì)胞:吸除固定液,用適當(dāng)緩沖液沖洗細(xì)胞數(shù)次。
4)細(xì)胞透化(可選):
像ICC等實驗需要細(xì)胞要做透化,則可將已固定的細(xì)胞直接加入含有去污劑如Triton X-100的緩沖液中孵育。透化結(jié)束后,用緩沖液清洗細(xì)胞即可進(jìn)行后續(xù)ICC實驗。經(jīng)檢測,利用含0.2% Triton X-100的PBS孵育內(nèi)皮細(xì)胞10 min可以達(dá)到良好的透化效果。
另外,還可利用預(yù)冷的丙酮透化5 min,之后用PBS清洗細(xì)胞。經(jīng)驗證,即使后繼沒有進(jìn)一步的抗體標(biāo)記,丙酮透化處理也可降低背景信號。
注意事項
1)DMSO有毒,使用時請小心操作。
2)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
3)本產(chǎn)品僅作科研用途!
HB211230