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參考價: | 面議 |
- 15005ES50 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問次數(shù):296更新時間:2023-07-20 23:58:21
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- 地址:
- 上海市浦東新區(qū)天雄路166弄1號3樓
- 網(wǎng)址:
- www.yeasen.com
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
---|---|---|---|
貨號 | 15005ES50 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
酶切點位
5'-GGTCTC(N)1↓-3'
3'-CCAGAG(N)5↑-5'
產(chǎn)品簡介
FuniCut™系列內(nèi)切酶是通過基因工程重組技術,可在5~15 min內(nèi)精確完成DNA切割的快速限制性內(nèi)切酶,適用于快速切割質(zhì)粒DNA、PCR產(chǎn)物、基因組DNA 等。FuniCut™系列快速內(nèi)切酶共用一種酶切緩沖液,從而簡化了酶切反應體系,另外,有良好的酶活冗余度,可輕松處理底物過量或困難模板的酶切。
產(chǎn)品信息
貨號 | 15005ES50 |
規(guī)格 | 50 T |
識別位置 | 5'-GGTCTC(N)1↓-3' 3'-CCAGAG(N)5↑-5' |
推薦反應條件 | 1×FuniCut™ 緩沖液;最適37℃孵育 |
酶活 | 20 U/μL |
失活條件 | 80℃孵育20 min |
組分信息
組分編號 | 組分名稱 | 15005ES50 |
15005-A | FuniCut™ BsaI | 50 μL |
15005-B | 10×FuniCut™ Buffer | 1 mL |
15005-C | 10×FuniCut™ Color Buffer* | 1 mL |
*10×FuniCut™ Color Buffer包括紅色和黃色示蹤染料,可將產(chǎn)物直接用于凝膠電泳。FuniCut™ Color Buffer的紅色染料與2500 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近;黃色染料與10 bp雙鏈DNA片段在1%瓊脂糖凝膠中遷移速率接近。
儲存條件
-25~-15℃保存,有效期2年。
注意事項
1.3 h孵育未表現(xiàn)星號活性,延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。
2.受CpG甲基化影響,序列重疊,剪切阻斷。
3.受Dcm甲基化影響,序列重疊,剪切阻斷。
4.受EcoBI甲基化影響,序列重疊,剪切阻斷。
5.為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
6.本產(chǎn)品僅作科研用途。
使用方法
1. DNA快速酶切流程
1) 按如下建議的加樣順序配制體系反應液(冰上操作)
組分 | 質(zhì)粒DNA | PCR產(chǎn)物 | 基因組DNA |
ddH2O | 15 μL | 16 μL | 30 μL |
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer | 2 μL | 3 μL* | 5 μL |
底物DNA | 2 μL (~1 μg) | 10 μL (~0.2 μg) | 10 μL (5 μg) |
FuniCut™ BsaI | 1 μL | 1 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 30 μL | 50 μL |
*本體系指已純化后的PCR產(chǎn)物。未純化的PCR產(chǎn)物具備一定的離子強度,10×FuniCutTM Buffer加入量可適當減少至2 μL。若下一步進行克隆等實驗,酶切前需純化PCR產(chǎn)物。
2) 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋),然后瞬時離心以收集掛壁液滴。
3) 37℃孵育15 min(質(zhì)粒),或15~30 min(PCR產(chǎn)物),或30~60 min(基因組DNA)。
4) 80℃孵育20 min 即可使酶失活,停止反應(可選)。
5) 如果使用FuniCut™ Color Buffer進行酶切反應,得到的產(chǎn)物可直接上樣電泳。
2. 雙酶切或多酶切
1) 每種內(nèi)切酶的用量為1 μL,并根據(jù)需要適當擴大反應體系。
2) 所有內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應體系的1/10。
3) 如果選用的幾種內(nèi)切酶的最適反應溫度不同,應先以最適溫度低的酶開始酶切,再添加最適溫度較高的酶,以較高的溫度進行孵育。
3. 質(zhì)粒的擴大反應體系
組分 | 體積(20 μL) | 體積(20 μL) | 體積(50 μL)* |
DNA | 1 μg | 2 μg | 5 μg |
10×FuniCut™ Buffer或10×FuniCut™ Color Buffer | 2 μL | 2 μL | 5 μL |
FuniCut™ BsaI | 1 μL | 2 μL | 5 μL |
Total | 20 μL | 20 μL | 50 μL |
*如果總反應體系大于20 μL,可使用水浴、金屬浴或沙浴,并增加孵育時間。
4. 不同DNA中的識別位點數(shù)
λDNA | ΦX174 | pBR322 | pUC57 | pUC18/19 | SV40 | M13mp18/19 | Adeno2 |
2 | 0 | 1 | 1 | 1 | 0 | 0 | 1 |
5. 甲基化修飾影響
Dam | Dcm | CpG | EcoKI | EcoBI |
無影響 | 序列重疊,剪切阻斷 | 序列重疊,剪切阻斷 | 無影響 | 序列重疊,剪切阻斷 |
6. 不同反應緩沖液中的活性*
反應緩沖液 | FuniCut™ Buffer | Thermo Scientific FastDigest Buffer | NEB CutSmart® Buffer | Takara QuickCut™ Buffer |
活性 | 100% | 100% | 100% | 100% |
*活性數(shù)據(jù)來自翌圣生物限制酶標準反應體系下的檢測。
Ver.CN20230706