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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 8T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 12258ES08 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
一步快速去除核糖體(rRNA去除)試劑盒（人）
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格/元 |
Hieff NGS® One-Step rRNA Removal Kit (Human，100-1,000 ng) 一步快速去除核糖體(rRNA去除)試劑盒（人） | 12258ES08 | 8 T | 3165 |
12258ES24 | 24 T | 11365 | |
12258ES96 | 96 T | 37365 |
產品描述
Hieff NGS® One-Step rRNA Removal Kit (Human，100-1,000 ng)利用靶向技術在cDNA合成過程中高特異性地抑制人總RNA中的核糖體RNA的逆轉錄，而不影響信使RNA (mRNA)、非編碼RNA以及環狀RNA等非靶RNA的cDNA合成，從而在一鏈cDNA合成過程中高特異性去除核糖體RNA。這種靶向去除技術相較于傳統的RNase H消化法具有耗時短 (3 min)、操作簡單（一步操作）和非靶RNA保留完整等優點，極大簡化了操作流程和提高了建庫效率，可以與市面上各類一鏈cDNA合成試劑配套。該試劑盒對于完整和部分降解的總RNA（如FFPE RNA）均具有良好的rRNA去除效果。經rRNA去除所獲得的cDNA樣本可用于高通量測序分析mRNA和非編碼RNA，可顯著提高測序結果中有效數據比例，也可用于其它cDNA下游應用。提供的試劑已經過嚴格的質量控制和功能驗證，保證了rRNA去除的穩定性和重復性。
適用范圍
適用于人來源的100-1000 ng 總RNA樣品；適用于完整或部分降解RNA（如FFPE RNA）樣品。
產品組分
產品組份 | 12258ES08 | 12258ES24 | 12258ES96 |
One-Step rRNA Removal Mix | 8 μL | 24 μL | 96 μL |
運輸與保存方法
干冰運輸，-20°C存放。效期兩年。
注意事項
一、關于操作
1. 請使用無RNase污染的耗材，并對實驗區域定期進行清理，推薦使用Thermo Fisher公司的RNAZap™ 高效核酸去除噴霧去除RNA酶污染。
2. RNA樣品應不含基因組DNA污染，若樣品中有gDNA殘留，應先進行DNase I消化并純化后再用于本試劑盒。
3.若樣品體積較大，可先進行濃縮。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5. 本產品僅作科研用途！
二、自備材料
1. qRT-PCR質檢rRNA去除效率：Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox) (Cat#11201)或其他等效產品；
2. 其他材料：無菌超純水、低吸附槍頭、PCR管、PCR儀等。
使用方法
一、操作流程
圖1.使用快速去除核糖體RNA試劑盒+RNA建庫試劑盒進行RNA建庫流程
二、操作步驟
方案1：在逆轉錄體系中去除rRNA。
1. 使用翌圣生物的Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat#11119)進行本試劑盒rRNA去除效率測試，其他逆轉錄試劑盒也可以用于本測試。
2. 逆轉錄反應體系配制（20 μL體系）
RNA不片段化體系 | RNA片段化體系 | |||
Total RNA | 100-1000 ng | Total RNA | 100-1000 ng | |
Random Primers N6 (50 μM) | 1 μL | Random Primers N6 (50 μM) | 1 μL | |
One-Step rRNA Removal Mix | 1 μL | One-Step rRNA Removal Mix | 1 μL | |
RNase free ddH2O | To 14 μL | 5×Hifair® Ⅱ Buffer | 4 μL | |
混勻后瞬離，按照下列反應程序進行反應： | RNase free ddH2O | To 18 μL | ||
75℃ | 1 min | 混勻后瞬離，按照下列反應程序進行反應： | ||
50℃ | 2 min | 94℃（片段化溫度和時間可根據需求自行調整） | 5 min | |
4℃ | Hold | 75℃ | 1 min | |
50℃ | 2 min | |||
上述反應體系 | 14 μL | 4℃ | Hold | |
5×Hifair® Ⅱ Buffer | 4 μL | |||
Hifair® Ⅱ Enzyme Mix | 2 μL | 上述反應體系 | 18 μL | |
Total | 20 μL | Hifair® Ⅱ Enzyme Mix | 2 μL | |
混勻后瞬離，按照下列反應程序進行反應： | Total | 20 μL | ||
25℃ | 5 min | 混勻后瞬離，按照下列反應程序進行反應： | ||
42℃ | 30 min | 25℃ | 5 min | |
85℃ | 5 min | 42℃ | 15 min | |
85℃ | 5 min | |||
3. qPCR檢測rRNA去除效果。
圖2. qPCR驗證一步rRNA快速去除試劑盒的去除效果
方案2：在RNA NGS文庫構建中去除rRNA。
1. 使用翌圣生物的Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Cat#12252 for Illumina, Cat#13333for MGI)進行本試劑盒rRNA去除效率測試。
RNA片段化 | |
組份 | 體積 |
Total RNA | 100-1000 ng |
2×Frag/Prime Buffer | 8.5 μL |
One-Step rRNA Removal Mix | 1 μL |
DEPC H2O | to 17 μL |
混勻后瞬離，按照下列反應程序進行反應： | |
溫度 | 時間 |
94℃（片段化溫度和時間可根據需求自行調整） | 5 min |
75℃ | 1 min |
50℃ | 2 min |
4℃ | Hold |
組份 | 體積 |
上述反應體系 | 17 μL |
Strand Specificity Reagent | 6 μL |
1st Strand Enzyme Mix | 2 μL |
Total | 25 μL |
混勻后瞬離，按照下列反應程序進行反應： | |
溫度 | 時間 |
25℃ | 10 min |
42℃ | 15 min |
70℃ | 15 min |
接Step 2第二鏈cDNA的合成/末端修復/加A | |
圖3. 二代測序驗證一步rRNA快速去除試劑盒的去除效果
2. 使用New England Biolabs的NEBNext Ultra II Directional RNA Library Prep Kit for Illumina (Cat#E7760)聯合本試劑盒進行rRNA去除方案。
RNA片段化 | |
組份 | 體積 |
Total RNA | 100-1,000 ng |
First Strand Synthesis Reaction Buffer (5×) | 4 μL |
Random Primers | 1 μL |
One-Step rRNA Removal Mix | 1 μL |
DEPC H2O | to 10 μL |
混勻后瞬離，按照下列反應程序進行反應： | |
溫度 | 時間 |
94℃（片段化溫度和時間可根據需求自行調整） | 5 min |
75℃ | 1 min |
50℃ | 2 min |
4℃ | Hold |
接下游一鏈合成體系 | |
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HB210923
