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翌圣生物科技（上海）股份有限公司

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12259ES08一步快速去除核糖體(rRNA去除)試劑盒（人）
參考價(jià): ￥ 3165
訂貨量: 1 臺(tái)
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 12259ES08 產(chǎn)品型號(hào)
  • Yeasen/翌圣生物 品牌
  • 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
  • 上海市 所在地

訪問(wèn)次數(shù)：361更新時(shí)間：2023-02-20 16:54:41

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 8 T
貨號(hào) 12259ES08 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè)
一步快速去除核糖體(rRNA去除)試劑盒（人）Hieff NGS® One-Step rRNA Removal Kit （Human，1-100 ng）利用靶向技術(shù)在cDNA合成過(guò)程中高特異性地抑制人總RNA中的核糖體RNA的逆轉(zhuǎn)錄，而不影響信使RNA （mRNA）、非編碼RNA以及環(huán)狀RNA等非靶RNA的cDNA合成，從而在一鏈cDNA合成過(guò)程中高特異性去除核糖體RNA。
產(chǎn)品介紹

一步快速去除核糖體(rRNA去除)試劑盒（人）

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱

產(chǎn)品編號(hào)

規(guī)格

價(jià)格/元

Hieff NGS® One-Step rRNA Removal Kit (Human，1-100 ng)

一步快速去除核糖體(rRNA去除)試劑盒（人）

12259ES08

8 T

3165

12259ES24

24 T

11365

12259ES96

96 T

37365


產(chǎn)品描述

Hieff NGS® One-Step rRNA Removal Kit (Human，1-100 ng)利用靶向技術(shù)在cDNA合成過(guò)程中高特異性地抑制人總RNA中的核糖體RNA的逆轉(zhuǎn)錄，而不影響信使RNA (mRNA)、非編碼RNA以及環(huán)狀RNA等非靶RNA的cDNA合成，從而在一鏈cDNA合成過(guò)程中高特異性去除核糖體RNA。這種靶向去除技術(shù)相較于傳統(tǒng)的RNase H消化法具有耗時(shí)短 (3 min)、操作簡(jiǎn)單（一步操作）和非靶RNA保留完整等優(yōu)點(diǎn)，極大簡(jiǎn)化了操作流程和提高了建庫(kù)效率，可以與市面上各類一鏈cDNA合成試劑配套。該試劑盒對(duì)于完整和部分降解的總RNA（如FFPE RNA）均具有良好的rRNA去除效果。經(jīng)rRNA去除所獲得的cDNA樣本可用于高通量測(cè)序分析mRNA和非編碼RNA，可顯著提高測(cè)序結(jié)果中有效數(shù)據(jù)比例，也可用于其它c(diǎn)DNA下游應(yīng)用。提供的試劑已經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量控制和功能驗(yàn)證，保證了rRNA去除的穩(wěn)定性和重復(fù)性。

適用范圍

適用于人來(lái)源的1-100 ng 總RNA樣品；適用于完整或部分降解RNA（如FFPE RNA）樣品。

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品組份

12259ES08

12259ES24

12259ES96

One-Step rRNA Removal Mix

8 μL

24 μL

96 μL

運(yùn)輸與保存方法

干冰運(yùn)輸，-20°C存放。效期兩年。

注意事項(xiàng)

一、 關(guān)于操作

1. 請(qǐng)使用無(wú)RNase污染的耗材，并對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)域定期進(jìn)行清理，推薦使用Thermo Fisher公司的RNAZap™ 高效核酸去除噴霧去除RNA酶污染。

2. RNA樣品應(yīng)不含基因組DNA污染，若樣品中有g(shù)DNA殘留，應(yīng)先進(jìn)行DNase I消化并純化后再用于本試劑盒。

3.若樣品體積較大，可先進(jìn)行濃縮。

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

5. 本產(chǎn)品僅作科研用途！

二、自備材料

1. qRT-PCR質(zhì)檢rRNA去除效率：Hieff® qPCR SYBR Green Master Mix(No Rox) (Cat#11201)或其他等效產(chǎn)品；

2. 其他材料：無(wú)菌超純水、低吸附槍頭、PCR管、PCR儀等。

 

使用方法

 

一、操作流程
 

9-1.png 

圖1. 使用快速去除核糖體RNA試劑盒+RNA建庫(kù)試劑盒進(jìn)行RNA建庫(kù)流程

 

二、操作步驟

方案1：在逆轉(zhuǎn)錄體系中去除rRNA。

1. 使用翌圣生物的Hifair® Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit (Cat#11119)進(jìn)行本試劑盒rRNA去除效率測(cè)試，其他逆轉(zhuǎn)錄試劑盒也可以用于本測(cè)試。

2. 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系配制（20 μL體系）

 

RNA不片段化體系


RNA片段化體系

Total RNA

1-100 ng


Total RNA

1-100 ng

Random Primers N6 (50 μM)

1 μL


Random Primers N6 (50 μM)

1 μL

One-Step rRNA Removal Mix

1 μL


One-Step rRNA Removal Mix

1 μL

RNase free ddH2O

To 14 μL


5×Hifair® Ⅱ Buffer

4 μL

混勻后瞬離，按照下列反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)：


RNase free ddH2O

To 18 μL

75℃

1 min


混勻后瞬離，按照下列反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)：

50℃

2 min


94℃（片段化溫度和時(shí)間可根據(jù)需求自行調(diào)整）

5 min

4℃

Hold


75℃

1 min




50℃

2 min

上述反應(yīng)體系

14 μL


4℃

Hold

5×Hifair® Ⅱ Buffer

4 μL




Hifair® Ⅱ Enzyme Mix

2 μL


上述反應(yīng)體系

18 μL

Total

20 μL


Hifair® Ⅱ Enzyme Mix

2 μL

混勻后瞬離，按照下列反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)：


Total

20 μL

25℃

5 min


混勻后瞬離，按照下列反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)：

42℃

30 min


25℃

5 min

85℃

5 min


42℃

15 min




85℃

5 min

                                                                  

3. qPCR檢測(cè)rRNA去除效果。

 

 

 9-2.png

 

圖2.qPCR驗(yàn)證一步rRNA快速去除試劑盒的去除效果

 

方案2：在RNA NGS文庫(kù)構(gòu)建中去除rRNA。

1. 使用翌圣生物的Hieff NGS® Dual-mode RNA Library Prep Kit (Cat#12252 for Illumina, 13333 for MGI)進(jìn)行本試劑盒rRNA去除效率測(cè)試。

 

RNA片段化

組份

體積

Total RNA

1-100 ng

2×Frag/Prime Buffer

8.5 μL

One-Step rRNA Removal Mix

1 μL

DEPC H2O

to 17 μL

混勻后瞬離，按照下列反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)：

溫度

時(shí)間

94℃（片段化溫度和時(shí)間可根據(jù)需求自行調(diào)整）

5 min

75℃

1 min

50℃

2 min

4℃

Hold



組份

體積

上述反應(yīng)體系

17 μL

Strand Specificity Reagent

6 μL

1st Strand Enzyme Mix

2 μL

Total

25 μL

混勻后瞬離，按照下列反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)：

溫度

時(shí)間

25℃

10 min

42℃

15 min

70℃

15 min

接Step 2第二鏈cDNA的合成/末端修復(fù)/加A

 

 

 9-3.png

 

圖3. 二代測(cè)序驗(yàn)證一步rRNA快速去除試劑盒的去除效果

 

 

2. 使用New England Biolabs的NEBNext Ultra II Directional RNA Library Prep Kit for Illumina (Cat#E7760)聯(lián)合本試劑盒進(jìn)行rRNA去除方案。

 

RNA片段化

組份

體積

Total RNA

1-100 ng

First Strand Synthesis Reaction Buffer (5×)

4 μL

Random Primers

1 μL

One-Step rRNA Removal Mix

1 μL

DEPC H2O

to 10 μL

混勻后瞬離，按照下列反應(yīng)程序進(jìn)行反應(yīng)：

溫度

時(shí)間

94℃（片段化溫度和時(shí)間可根據(jù)需求自行調(diào)整）

5 min

75℃

1 min

50℃

2 min

4℃

Hold

接下游一鏈合成體系

 

3. 其他品牌RNA 建庫(kù)試劑盒請(qǐng)咨詢！

 

 

HB210923




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