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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 8T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 12607ES08 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module 快速DNA連接模塊 | 12607ES08 | 8T | 1283.00 |
12607ES24 | 24T | 2933.00 | |
12607ES96 | 96T | 9773.00 |
產品描述
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module是針對Illumina®高通量測序平臺文庫構建專業設計的DNA連接模塊。本產品可在雙鏈平末端DNA////片段或雙鏈3′-dA DNA////片段的兩端連接Illumina®測序平臺適用的DNA接頭，具有連接效率高、簡便、可實現自動化等優勢。本產品已與Hieff NGS® End Repair/dA-Tailing Module（Cat#12608），2×Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文庫構建，通過Illumina®高通量平臺測序驗證其有效性。本產品中提供的所有試劑組分，都經過嚴格的質量與功能驗證，最高程度保障產品優異性能與批間穩定性。
產品組分
產品編號 | 組分名稱 | 規格 | |
12607ES24 | 12607ES96 | ||
12607-A | Fast-Pace T4 DNA Ligase | 120 μL | 480 μL |
12607-B | 5×Fast-Pace Ligation Buffer | 480 μL | 960×2 μL |
測序驗證
本品與Hieff NGS® End Repair/dA-Tailing Module（Cat#12608），2×Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文庫構建，通過Illumina®高通量平臺測序驗證其有效性。
運輸與保存方法
冰袋運輸。
-20℃保存，效期一年。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
2）本產品僅作科研用途!
使用方法
1. Adapter的質量和使用濃度直接影響連接效率及文庫產量。Adapter用量過高可能會產生較多Adapter Dimer；用量較低可能會影響連接效率及文庫產量。表1列舉了使用本試劑盒，不同Input DNA量推薦的Adapter使用量。
表1.500 pg-1 μg Input DNA推薦的Adapter使用濃度
Input DNA | Adapter : Input DNA摩爾比 | Input DNA | Adapter : Input DNA摩爾比 |
500 ng | 20:1 | 25 ng | 200:1 |
250 ng | 40:1 | 10 ng | 200:1 |
100 ng | 100:1 | 1 ng | 200:1 |
50 ng | 100:1 | 500 pg | 400:1 |
【注】：Input DNA摩爾數（pmol）≈ Input DNA質量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度（bp）]。
2. 目前主流的合并法DNA建庫試劑盒，其末端修復和加A處理后一般不純化，直接進行接頭連接。本試劑盒可與主流的商業化末端修復加A體系兼容，進行接頭連接。反應體系請參考如下配制，并渦旋混勻幾秒鐘，瞬離后至于20℃，反應15分鐘即可。
表2.Adapter Ligation體系
名稱 | 體積（μL） |
dA-tailed DNA | 60 |
5×Fast-Pace Ligation Buffer | 20* |
Fast-Pace T4 DNA Ligase | 5 |
DNA Adapter | X** |
dd2O | To 100 |
【注】：*對于Ligation Enhancer，請上下顛倒、振蕩，充分混勻并瞬時后離心使用。
**根據自身需求加入適量的接頭。
【接頭添加計算舉例】：當Input DNA為100 ng，Input DNA長度為300 bp時，接頭應該添加多少？
第一步，計算Input DNA摩爾數。公式：Input DNA摩爾數（pmol）≈ Input DNA質量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均長度（bp）]；
Input DNA 摩爾數（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol；
第二步，計算接頭添加摩爾數。根據注意事項三表2查詢接頭添加比例；
根據表2，查得Input DNA 100ng時接頭添加比例100:1，則接頭添加摩爾數=100×0.5 pmol=50 pmol；
第三步，計算接頭添加體積。接頭濃度=15 μmol/L（如使用其他接頭，濃度需要依據其他接頭濃度參數）；
接頭添加體積=接頭添加摩爾數（50 pmol）÷接頭濃度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）
綜上，接頭可添加3.4 μL，加1.6 μL水補齊至5 μL。（注：接頭最大加入體積不超過5 μL）
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