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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1ml |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 36417ES03 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品性質
基質（Matrix spherical） | 聚合物磁性微球 |
配體（Ligand） | 重組Protein A/G |
結合能力（Binding Capacity） | ＞50µg hIgG /mg |
粒徑 （Particle size） | 1μm |
磁珠濃度（Concentration） | 10mg/mL |
儲存緩沖液（Storage Buffer） | PBS，0.01% Tween-20, 0.02% NaN3 |
應用（Application） | rProtein Purification, Immunoprecipitation |
運輸和保存方法
低溫運輸。2-8℃長期儲存，有效期2年。
注意事項
1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。本產品僅作科研用途！
使用方法
工作液濃度應根據具體實驗確定，建議進行預實驗摸索最佳實驗濃度。
1. 緩沖液配制
平衡/結合/ 洗雜液: | 0.15M NaCl, 20 mM Na2HPO4, pH 7.0 |
交聯液： | 0.2 M 三乙醇胺, pH 8.2 |
中和緩沖液： | 1M Tris-HCl，pH 8.5 |
洗脫緩沖液： 終止液： | 0.1M 甘，pH 3.0 50 mM Tris, pH 7.5 |
2. 抗原樣品制備
本操作說明書提供以下四種樣品處理方法，建議您根據不同來源的抗原樣品選擇適當的方式進行預處理，使待檢測抗原釋放至樣品溶液中。
血清樣品處理：若目標蛋白豐度較高， 建議用結合緩沖液稀釋血清樣品至目標蛋白終濃度為10-100µg/mL，置于冰上備用(或置于-20℃長期保存)。
懸浮細胞樣品處理：離心收集細胞（4℃, 500g, 10min），棄上清后稱重，按每毫克細胞50µL的比例用1×PBS洗滌2次；按每毫克細胞5-10µL的比例加入結合緩沖液，同時加入蛋白酶抑制劑，混勻后置于冰上處理10min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。
貼壁細胞樣品處理：移去培養基，按每 1.0×105個細胞150µL的比例用1×PBS洗滌兩次；用細胞刮棒刮脫細胞，收集至1.5mL EP管內，按每 1.0×105個細胞20-30µL的比例加入結合緩沖液，同時加入蛋白酶抑制劑，混勻后置于冰上處理10min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。
大腸桿菌樣品處理： 離心收集大腸桿菌（4℃, 12000g, 2min）， 棄上清后稱重， 按每克（濕重）菌體10mL的比例用1×PBS洗滌2次；按每克（濕重）菌體5-10mL的比例加入結合緩沖液，同時加入蛋白酶抑制劑，重懸菌體，超聲裂解細胞，離心收集上清（4℃, 17000g, 10min）。
3. 磁珠預處理：將磁珠漩渦振蕩1min，使其充分混懸；取25-50µL（相當于50-100µg）磁珠懸液置于1.5mL EP管中。加入200µL結合緩沖液洗滌，進行磁性分離，吸棄上清，重復1次。加入200 µL結合緩沖液重懸磁珠備用。
4. 抗體吸附
1) 加入 100 μL平衡液將磁珠懸浮，加入目標抗體溶液，充分混勻。
2) 室溫孵育 10min，可以振蕩或漩渦混合均勻。
3) 將EP 管置于磁分離器上，待磁珠全部吸附后，吸棄上清液。如需要可留做進一步檢測。
4) 加入500μL 洗雜液混合均勻，置于磁分離器上，待磁珠全部吸附后，吸棄上清液。重復 洗雜至少 3次。
5. 抗體交聯 (備選)
1） 如果需要將抗體和目標抗原復合物共同洗脫，請忽略本步驟，直接進行操作6。 50μL-1mL 磁珠量均可以按照以下步驟操作，無需額外增加交聯液體積。
2）加入 1mL交聯液，振蕩懸浮，置于磁分離器上，大約1min，待溶液變澄清后，吸棄上清液。該操作重復兩次。
3）再加入1mL含有20 mM DMP（dimetylpimelimidate dihydrochloride）的交聯液， 此試劑需要現用現配。振蕩懸浮，在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉離心管， 促使溶液和磁珠充分接觸，約30min后，置于磁分離器上，大約 1min，待溶液變澄清 后，吸棄上清液。
4）使用1mL終止液懸浮磁珠，終止交聯反應，在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉離心管，促使溶液和磁珠充分接觸，約15min后，置于磁分離器上，大約 1min，待溶液變澄清后，吸棄上清液。
5）加入1mL平衡液，顛倒混勻，置于磁分離器上，大約 1min，待溶液變澄清后，吸棄上清液。再重復兩次。
6. 抗原結合反應
1) 加入含有抗原的樣品（通常100-1000μL)，用移液器輕輕吹打使抗原與磁珠-抗體復合物均勻分散。
2) 在室溫下置于翻轉混合儀或者手工輕輕翻轉離心管 10min，使抗原與抗體充分結合，如結合力較弱則可在室溫下反應1h或者在4℃下反應過夜。
3) 上述完成抗原吸附的磁珠-抗體-抗原復合物進行磁性分離，收集上清液，以備后續檢測。
4) 向離心管中加入1mL洗雜液，用移液器輕輕吹打使磁珠-抗體-抗原復合物均勻分散，然后進行磁性分離，棄上清液；從磁分離器上取下離心管，再重復洗滌兩次。
7．抗原洗脫
A. 變性洗脫 此方法洗脫的樣品適用于SDS-PAGE檢測。
1) 從磁分離器上取下離心管，向其中加入25μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer 混合均勻， 95℃加熱 5min。
2) 置于磁性分離器上，進行磁性分離，收集上清液進行SDS-PAGE檢測。
B. 非變性洗脫
1) 向磁珠-抗體-抗原復合物中加入50 μL 洗脫液，混合均勻，室溫孵育5min。
2) 置于磁性分離器上，進行磁性分離，收集洗脫液至新的 EP 管中。
3) 重復步驟 1）和2），收集洗脫液，與2）中洗脫液混合，加入中和液中和至 pH7.0-8.0。
HB210916
