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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 11212ES03 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
產品介紹
產品描述
多重熒光定量PCR預混液(含UDG)本產品是2×Mix預混合試劑，能夠實現在單個反應孔中進行多達四重的熒光定量PCR反應。本產品含有基因改造的抗體法熱啟動Taq酶，極大地提高了擴增靈敏度和特異性。同時，本產品對多重反應緩沖體系進行了深度優化，能夠提高反應的擴增效率，促進低濃度模板的有效擴增。本產品可用于基因分型和基因多重定量分析。本產品含有UDG酶，可有效防止氣溶膠污染的風險。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產品編號/規格 | ||||
11212ES03 (1 mL) | 11212ES08 (5×1 mL) | 11212ES12 (12.5 mL) | 11212ES60 (20×5 mL) | 11212ES62 (125 mL) | ||
11212 | 2×Hieff Unicon® Universal TaqMan qPCR mix (UDG plus) | 1 mL | 5×1 mL | 12.5 mL | 20×5 mL | 125 mL |
運輸與保存方式
冰袋運輸。-20℃保存，有效期1年。
注意事項
一、關于操作
1）請于使用前確保產品*解凍并*混勻，短暫離心收集至管底后，置于冰上備用。
2）為避免樣品間交叉污染和氣溶膠污染，推薦在超凈臺中進行反應體系的配制。
3）使用過程中避免產品的反復凍融。
4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
二、實驗方法
a) 引物設計
1. 引物必須具有特異性。
2. 引物的Tm值必須在58-60°C，而且各組引物的Tm差異應控制在1-2°C。
3. 引物的長度一般控制在15-30 bp之間。
b) 探針設計
1. TaqMan探針的Tm值要比對應的引物高約10°C（68-70°C）。
2. TaqMan探針和引物間不能形成二聚體。
反應體系f
組分 | 體積 (μL) | 終濃度 |
2×Hieff Unicon® Universal TaqMan qPCR mix (UDG plus) | 12.5 | 1× |
Primer mix (10 μM) | X | 0.1-0.5 μMa |
Probe mix (10 μM) | X | 50-250 nMb |
Rox reference dyec | 0.5 | 1× |
Template DNA/cDNAd | 1-10 | - |
ddH2O | up to 25e | - |
【注】：使用前務必充分混勻，避免劇烈震蕩產生過多氣泡。
a) 引物濃度：Primer Mix中包含多對引物，通常每條引物終濃度為0.2 μM，也可以根據情況在0.1-0.5 μM間進行調整。
b) 探針濃度：Probe Mix中包含多條不同熒光信號的探針，每條探針的濃度可根據具體情況在50-250 nM間調整。
c) Rox reference dye：使用在Applied Biosystems 等Real Time PCR 擴增儀上，用以校正孔與孔之間產生的熒光信號誤差；本產品不含Rox reference dye。如需，推薦使用貨號10200ES產品。
d) 模板稀釋：qPCR靈敏度*，建議將模板進行稀釋使用。若模板為cDNA原液，則模板體積不超過總體積的1/10；
e) 反應體系：推薦使用25 μL、30 μL或50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
f) 體系配制：請于超凈工作臺內配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
參考擴增程序
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
污染降解 | 25℃ | 10 min | 1 |
預變性 | 95℃ | 5 min | 1 |
變性 | 95℃ | 15 sec | 45 |
退火/延伸a | 60℃ | 30 secb |
【注】： a) 退火/延伸：溫度和時間可根據實驗要求適當調整。
b) 熒光信號采集：請按照儀器使用說明書要求進行實驗程序設置，幾種常見儀器的時間設定如下：
20 sec：Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sec：Applied Biosystems 7300
32 sec：Applied Biosystems 7500
相關產品
產品名稱 | 貨號 | 規格 |
Hieff Unicon® Universal TaqMan multiplex qPCR master mix | 11211ES03/09/61 | 1 mL/5 mL/100 mL |
Hieff® anti-Taq DNA Polymerase Antibody Taq酶單克隆抗體 | 31301ES60/80/90/92/93/94 | 100 μg/1 mg/5 mg/10 mg/100 mg/1000 mg |
Uracil DNA Glycosylase (UDG), heat-labile 熱敏UDG | 10303ES60/76/96/98 | 100 U/500 U/10000 U/100000 U |
dUTP, 100 mM Solution 脫氧尿苷三磷酸溶液（100 mM） | 10128ES72/80/96/98 | 250 μL/1 mL/25 mL/500 mL |
HB220224
