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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1ML |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 11184ES03 | 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱
產品編號
規格
價格（元）
*（元）
Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix
實時熒光定量PCR擴增預混液
11184ES03
1 mL
383.00
223.00
Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix 實時熒光定量PCR擴增預混液
11184ES08
5×1 mL
1653.00
663.00
Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix 實時熒光定量PCR擴增預混液
11184ES50
10×5 mL
12533.00
6613.00
Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix 實時熒光定量PCR擴增預混液
11184ES60
20×5 mL
19833.00
12563.00
產品描述
實時熒光定量PCR擴增預混液是2×實時定量PCR擴增的預溶液，具有高靈敏度和高特異性的特點，顏色為藍色，具有加樣示蹤的作用。核心組分Hieff UNICON® Taq DNA聚合酶采用抗體法熱啟動，可以有效抑制樣品準備過程中引物退火導致的非特異性擴增。同時配方添加了提升PCR反應擴增效率因子和均衡不同GC含量（30~70%）基因擴增的促進因子，使定量PCR可以在寬廣的定量區域內獲得良好的線性關系。
本產品中含有特殊的ROX Passive Reference Dye，適用于所有qPCR儀器，無需在不同的儀器上調整ROX的濃度，只需在配制反應體系時加入引物和模板即可進行擴增。
運輸和保存方式
冰袋運輸。-20℃避光儲存，有效期18個月。
本品避免反復凍融。產品中含有熒光染料SYBR Green I，保存或配制反應體系時需避免強光照射。
注意事項
1. 推薦使用本公司cDNA合成試劑盒（貨號：11141ES），以有效去除RNA樣品中殘留的基因組。
2. 解凍后Master Mix可能出現絮狀或白色沉淀，手握緩慢溶解并上下輕柔顛倒混勻至溶液澄清，不影響試劑性能。
3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。4. 本產品僅作科研用途!
反應體系
組分
體積（μL）
體積（μL）
終濃度
Hieff UNICON® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix
25
10
1×
Forward Primer (10 μM)
1
0.4
0.2 μM
Reverse Primer (10 μM)
1
0.4
0.2 μM
模板DNA
X
X
-
無菌超純水
to 50
to 20
-
【注】：使用前務必充分混勻，避免劇烈震蕩產生過多氣泡。
a) 引物濃度：通常引物終濃度為0.2 μM，也可以根據情況在0.1-1.0 μM之間進行調整。
b) 模板濃度：如模板為未稀釋cDNA原液，使用體積不應超過qPCR反應總體積的1/10。
c) 模板稀釋：cDNA原液建議5-10倍稀釋，最佳模板加入量以擴增得到的Ct值在20-30個循環為好。
d) 反應體系：推薦使用20 μL或50 μL，以保證目的基因擴增的有效性和重復性。
e) 體系配制：請于超凈工作臺內配制，并使用無核酸酶殘留的槍頭、反應管；推薦使用帶濾芯的槍頭。避免交叉污染和氣溶膠污染。
標準程序
循環步驟
溫度
時間
循環數
預變性
95℃
2 min
1
變性
95℃
10 sec
40
退火/延伸
60℃
30 sec★
熔解曲線階段
儀器默認設置
1
快速程序
循環步驟
溫度
時間
循環數
預變性
95℃
30 sec
1
變性
95℃
3 sec
40
退火/延伸
60℃
20 sec★
熔解曲線階段
儀器默認設置
1
【注】 快速程序適用于絕大多數基因，個別復雜二級結構基因可嘗試標準程序。
a) 退火溫度和時間：請根據引物和目的基因的長度進行調整。
b) 熒光信號采集（★）：請按照儀器使用說明書要求進行實驗程序設置，幾種常見儀器的時間設定如下：
20 sec：Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 sec：Applied Biosystems 7300
32 sec：Applied Biosystems 7500
c) 熔解曲線：通常情況下可以使用儀器默認程序。
結果分析
定量實驗至少需要三個生物學重復。反應結束后需要確認擴增曲線及熔解曲線。
1) 擴增曲線：標準擴增曲線為S型。
Ct值落在20-30之間時，定量分析最準確；
Ct值小于10，需要將稀釋模板后，重新進行實驗；
Ct值介于30-35之間時，需要提高模板濃度，或者增大反應體系的體積，以提高擴增效率，保證結果分析的準確性；
Ct值大于35時，檢測結果無法定量分析基因的表達量，但可用于定性分析。
2) 熔解曲線：
熔解曲線單峰，表明反應特異性好可以進行定量結果分析；若熔解曲線出現雙峰或者多峰，則不能進行定量分析。
熔解曲線出現雙峰，需要通過DNA瓊脂糖凝膠電泳判斷非目標峰是引物二聚體還是非特異性擴增。
如果是引物二聚體，建議降低引物濃度，或者重新設計擴增效率高的引物。
如果是非特異性擴增，請提高退火溫度，或者重新設計更高特異性的引物。
引物設計指南
1. 推薦引物長度25 bp左右。擴增產物長度150 bp為佳，可以在100 bp-300 bp內選擇。
2. 正向引物和反向引物的Tm值相差不宜超過2℃。引物Tm值60℃-65℃為佳。
3. 引物堿基分布要均勻，避免出現連續的4個相同堿基，GC含量控制在50%左右。3’端最后一個堿基最好為G或C。
4. 引物內部或者正反兩條引物間最好避免出現有3個堿基以上的互補序列。
5. 引物特異性需要用NCBI BLAST程序進行核對。避免引物3’端有2個堿基以上的非特異性互補。
6. 設計完成的引物需要進行擴增效率的檢測，只有具備相同擴增效率的引物才可用于定量比較分析。
適用機型
ABI: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT Fast, StepOne, StepOne Plus; 7500, 7500 Fast, ViiA7, QuantStudio 3 and 5, QuantStudio 6,7,12k Flex;
Stratagene: MX3000P, MX3005P, MX4000P;
Bio-Rad: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
Qiagen: Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler 2.0; Lightcycler 96;
Thermo Scientific: PikoReal Cycler;
Cepheid: SmartCycler; Illumina: Eco qPCR.
相關產品
產品名稱
貨號
規格
*（元）
Hifair® III 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR(gDNA digester plus) HOT
11141ES60
100T
1383.00
HB210701
