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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1g |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 40815ES03 | 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
Polyethylenimine, Linear, MW 25000, Transfection Grade (PEI 25000)
線性PEI轉染試劑 聚乙烯亞胺 MW25000
產品描述
線性PEI轉染試劑 聚乙烯亞胺 MW25000是一種高電荷陽離子聚合物，非常容易結合帶負電荷的核酸分子，形成復合物，并使該復合物進入細胞中。該轉染試劑是一種瞬時轉染試劑，細胞毒性低，轉染效率高，在HEK293和CHO等細胞中基因表達效率較高。目前已經驗證線性PEI轉染試劑廣泛適用于多種細胞系包括HEK-293、HEK293T、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3、Sf9、HepG2和Hela細胞等。該試劑與含血清的培養基兼容，能高效的將核酸導入細胞。
產品性質
中文名（Chinese Name） | 線性聚乙烯亞胺PEI 25000 |
英文名（English Name） | Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000 |
CAS號（CAS No.） | 9002-98-6, 26913-06-4 |
分子式（Molecular formula） | (CH2CH2NH)n |
分子量（Molecular weight） | 25,000 |
外觀（Appearance） | 白色至黃色固體 |
熔點（Melting Point） | 73~75 ℃ |
溶解性（Solubility） | 溶于：熱水，低pH的冷水，甲醇和乙醇。不溶于：苯和丙酮 |
結構式（Structure） |
|
運輸與保存方法
運輸方式：室溫運輸。
保存方式：粉末在室溫或4 oC保存，有效期2年。儲存液-20 °C保存，有效期1年；4 °C保存，有效期2周。不可重新凍存。
注意事項
1）配置好的PEI溶液從-20 oC拿出融化后，可放在4 oC冰箱保存，絕不可重新凍存。
2）對大多數細胞來而言，每1 μg DNA 使用 3.0 μL PEI轉染試劑都能獲得較高轉染效率。也可嘗試每1 μg DNA使用1.5~4 μL體積線性PEI轉染試劑進行優化。
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套及通風櫥操作。
4）本產品僅用于科研用途，不可用于人體。
儲存液配置（1 mg/mL）
1.材料
PEI 25000、Milli-Q® 水/注射用水（WFI）或類似的生物級水、12 mol/L鹽酸（HCl）、10 mol/L氫氧化鈉（NaOH）、一次性0.1~0.2 μm PES真空無菌過濾器、無菌HDPE或聚丙烯儲存瓶。
2. 配置儲存液（1 mg/mL）
1）于1 L玻璃燒杯，將1g PEI 25000粉末加入900 mL Milli-Q®超純水或其他相當級別的生物用水中，在磁子攪拌器上攪拌均勻，產生小渦。
2）邊攪拌邊滴加入鹽酸（12 mol/L）調節pH，直至pH＜2.0。
3）蓋上燒杯頂部并攪拌3小時至溶解；整個過程要保持pH＜2.0。
【注】：可能會存在一些小纖維狀顆粒不能溶解，這是正常現象。
4）邊攪拌邊滴加入NaOH（10 mol/L）調節pH，直至到6.9 ~7.1。
5）將溶液轉入量筒內，并加水定容到1 L。
6）用一次性0.1~0.2 µm PES真空過濾器過濾除菌，即得到1 mg/mL的儲存液。
7）根據需要分裝并儲存在-20 °C，1年穩定。
【注】：儲存液再次融化后，可置于4 °C保存，2周穩定，但絕不可重新凍存。
轉染操作流程（以6孔板為例）
1.接種細胞：為了提高轉染效率，建議在轉染前一天接種細胞，以轉染時細胞密度在 70%~80%為宜。
2.準備DNA-PEI復合物：按照以下體系配制DNA-PEI核酸-轉染試劑復合物：
1）對于每孔細胞，使用100 μL無血清培養基稀釋2 μg目的DNA ，充分混勻成 DNA稀釋液。
【注】：無血清稀釋液建議采用 Opti-MEM或ddH2O
2）立刻向100 μL的DNA稀釋液中加入5 μL的PEI 25000轉染試劑，旋渦10秒，充分混勻。
3）在室溫下孵育10~25 min，使得形成DNA-PEI陽離子核酸轉染試劑復合物。
3.轉染細胞：
1）在形成復合物過程中，移除細胞生長培養基，每孔中加入2 mL新鮮預熱的培養基。
2）直接將100 μL DNA-PEI核酸-PEI復合物加入細胞中，搖動培養板，輕輕混勻。
3）37 ℃，5% CO2培養箱培養，轉染后最快7 h即可檢測到轉入基因的表達。請自行確定適合檢測時間。
4.穩轉篩選（可選）
轉染 24 h 后，將細胞傳代至新鮮的生長培養基中（將細胞稀釋10倍以上），37 ℃，5% CO2培養箱孵育過夜。第二天加入與轉染抗性基因相匹配的篩選藥物。約1~2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。
不同細胞培養容器轉染用量（僅供參考）：
培養皿 | 表面積（cm2） | DNA的量（μg） | 轉染試劑的量（μL） | 稀釋液體積（μL） | 培養基總量 |
96孔板 | 0.3 | 0.1 | 0.1 | 10 | 100 μL |
48孔板 | 0.7 | 0.2 | 0.3 | 20 | 200 μL |
24孔板 | 1.9 | 0.5 | 1 | 50 | 500 μL |
12孔板 | 3.8 | 1 | 2 | 50 | 1mL |
6孔板 | 10 | 2 | 4 | 100 | 2 mL |
25cm2培養瓶 | 21 | 4 | 8 | 200 | 4 mL |
75cm2培養瓶 | 58 | 10 | 20 | 500 | 10 mL |
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