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13341ES16Fast-Pace DNA環(huán)化試劑盒
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 13341ES16 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪問(wèn)次數(shù)：1792更新時(shí)間：2022-02-10 10:32:48
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 16T |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | 13341ES16 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
產(chǎn)品介紹
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI®
Fast-Pace DNA環(huán)化試劑盒
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） |
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI® MGI®測(cè)序平臺(tái)Fast-Pace DNA 環(huán)化試劑盒 | 13341ES16 | 16T | 1853.00 |
13341ES96 | 96 T | 9253.00 |
產(chǎn)品描述
Hieff NGS® Fast-Pace DNA Cyclization Kit for MGI®是針對(duì)MGI®高通量測(cè)序平臺(tái)專門(mén)開(kāi)發(fā)設(shè)計(jì)的單鏈環(huán)化試劑盒。本產(chǎn)品采用高質(zhì)量的酶和經(jīng)優(yōu)化后的buffer組成，顯著提高反應(yīng)效率，使整個(gè)環(huán)化消化流程在30 min內(nèi)完成。本試劑盒適用于所有連接華大標(biāo)準(zhǔn)接頭的文庫(kù)擴(kuò)增產(chǎn)物，除建庫(kù)試劑本身的限制外，本環(huán)化試劑盒不限MGI®測(cè)序平臺(tái)。
產(chǎn)品組分
組分編號(hào)與名稱 | 13341ES16 | 13341ES96 | |
13341-A | Splint Oligo | 96 μL | 576 μL |
13341-B | Splint Buffer | 240 μL | 2×720 μL |
13341-C | Ligase | 80 μL | 480 μL |
13341-D | Digestion Buffer | 128 μL | 768 μL |
13341-E | Digestion Enzyme | 32 μL | 192 μL |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。
所有組分-20°C保存，有效期1年。
注意事項(xiàng)
一、關(guān)于操作
1. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
2. 請(qǐng)于使用前將試劑盒各組分置于室溫解凍。解凍后上下顛倒數(shù)次充分混勻，短暫離心后置于冰上待用。
3. 配制各步驟反應(yīng)液時(shí)推薦使用移液器吹打混勻或輕輕振蕩，劇烈振蕩可能會(huì)造成文庫(kù)產(chǎn)出下降。
4. 為避免樣品交叉污染，推薦使用帶濾芯的槍頭，吸取不同樣品時(shí)請(qǐng)更換槍頭。
5. 推薦在帶熱蓋的PCR儀中進(jìn)行各步驟反應(yīng)，使用前應(yīng)預(yù)熱PCR儀至反應(yīng)溫度附近。
6. 定時(shí)對(duì)各實(shí)驗(yàn)區(qū)域進(jìn)行清潔（使用0.5%次氯酸鈉或10%漂白劑進(jìn)行擦拭清理），以保證實(shí)驗(yàn)環(huán)境的潔凈度。
二、樣本要求及處理
2.1樣本量要求
1. 本試劑盒推薦的Input DNA量為1 pmol；若PCR產(chǎn)物不足，低可降至0.5 pmol投入量。
2. 若有特殊的環(huán)化投入量需求，則按照文庫(kù)制備試劑盒的要求投入所需的 Input DNA 量。
3. 不同片段大小 DNA 1 pmol 分子對(duì)應(yīng)不同的質(zhì)量，可根據(jù)公式 1 計(jì)算或參考表 1 選擇所需的 Input DNA 量：
公式 1 PCR 產(chǎn)物摩爾數(shù)與質(zhì)量間的換算
1 pmol PCR 產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的質(zhì)量 (ng)=DNA 主片段大小 (bp)×0.66
表1 不同片段大小PCR產(chǎn)物1pmol對(duì)應(yīng)產(chǎn)量
插入片段大小（bp） | PCR產(chǎn)物主片段大?。╞p） | 1 pmol對(duì)應(yīng)產(chǎn)量（ng） |
150 | 230 | 152 |
200 | 280 | 185 |
250 | 330 | 218 |
300 | 380 | 251 |
2.2 樣本混樣要求
1. Input DNA 可以是單個(gè)樣本，也可以是多個(gè)帶有不同 Barcodes 的樣本的混合物。
2. 對(duì)樣本進(jìn)行混合時(shí)需滿足 Barcodes 混合的要求，可參考表Adapters 試劑盒說(shuō)明書(shū)選擇合適的 Barcodes 進(jìn)行混合。
3. 混合的樣本總量推薦為 1 pmol，若每個(gè)樣本所需數(shù)據(jù)量相同，則等量混合，每個(gè)樣本所需的質(zhì)量按照公式 2 進(jìn)行計(jì)算：
公式 2 混合樣本中單個(gè)樣本所需質(zhì)量的計(jì)算
單個(gè)樣本所需的質(zhì)量(ng)=1 pmol Input DNA 對(duì)應(yīng)的質(zhì)量（ng） /混合的樣本個(gè)數(shù) N
4. 單個(gè)樣本或混合后樣本用于環(huán)化時(shí)，體積應(yīng)為 34 μL，若不足則用 ddH2O 補(bǔ)充至 34 μL。
三、關(guān)于磁珠純化（Bead-based Clean Up）
1. 磁珠使用前應(yīng)先平衡至室溫，否則會(huì)導(dǎo)致純化得率下降。
2. 磁珠每次使用前都應(yīng)充分振蕩混勻或使用移液器上下吹打充分混勻。
3. 磁珠漂洗使用的80%乙醇應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，否則將影響回收效率。
4. 產(chǎn)物洗脫前應(yīng)將磁珠置于室溫干燥。干燥不充分容易造成無(wú)水乙醇?xì)埩粲绊懞罄m(xù)反應(yīng)；過(guò)分干燥又會(huì)導(dǎo)致磁珠開(kāi)裂進(jìn)而降低純化得率。通常情況下，室溫干燥約5 min。
5. 單鏈環(huán)產(chǎn)物純化保存，可使用TE Buffer洗脫，產(chǎn)物可于-20°C可保存1個(gè)月。
四、關(guān)于文庫(kù)質(zhì)檢（Library Quality Analysis）
1.單鏈環(huán)產(chǎn)物純化后推薦使用 Qubit® ssDNA Assay Kit 單鏈 DNA 熒光染料試劑對(duì)純化后產(chǎn)物進(jìn)行定量。
2. 針對(duì)華大智造高通量測(cè)序平臺(tái)， 單鏈環(huán)產(chǎn)物純化后產(chǎn)量應(yīng)≥ 80 fmol （足夠2次上機(jī)測(cè)序）。
3. 可根據(jù)公式 3 計(jì)算或參考表 2 。
公式 3 單鏈環(huán)摩爾數(shù)與質(zhì)量間的換算
80 fmol 單鏈環(huán)對(duì)應(yīng)的質(zhì)量 (ng)=0.08×DNA 主片段大小 (bp)×0.33
表2 不同PCR產(chǎn)物片段大小對(duì)應(yīng)80fmol單鏈環(huán)產(chǎn)量
插入片段大?。╞p） | PCR產(chǎn)物主片段大?。╞p） | 80 fmol對(duì)應(yīng)產(chǎn)量（ng） |
150 | 230 | 6.07 |
200 | 280 | 7.39 |
250 | 330 | 8.71 |
300 | 380 | 10.03 |
使用方法
一、自備材料
1. 純化磁珠：Cat#12601，Hieff NGS® DNA Selection Beads或Cat#A63880，AMPure XP Beads或其他等效產(chǎn)品。
2. 文庫(kù)質(zhì)控：Cat # Q10212, Thermo fisher Qubit® ssDNA Assay Kit。
3. 其他材料：無(wú)水乙醇、滅菌超純水、TE Buffer（10 mM Tris-HCl，pH 8.0-8.5+0.1 mM EDTA）、低吸附EP管、PCR管、磁力架、PCR儀等。
二、操作流程
圖1 單鏈環(huán)化文庫(kù)構(gòu)建流程
三、操作步驟
3.1 變性
1. 根據(jù)文庫(kù)長(zhǎng)度， 取1 pmol至0.2 mL PCR 管中，用 ddH2O 補(bǔ)充至 34 μL。
2. 將表3中試劑解凍后，顛倒混勻并置于冰上備用。
3. 于冰上配制表3反應(yīng)體系。
表3 DNA變性體系
名稱 | 體積（μL） |
單個(gè)或混合好的雙鏈文庫(kù) | 34 |
Splint Oligo | 6 |
Total | 40 |
4. 混勻后，在 PCR 儀上進(jìn)行 98℃變性 3 min，之后立即置于冰上，冰浴 2 min 后瞬時(shí)離心。
3.2 單鏈環(huán)化
1. 將表 4 中各試劑解凍后，顛倒混勻，置于冰上備用。
2. 于冰上配制表4反應(yīng)體系。
表4單鏈環(huán)化體系
名稱 | 體積（μL） |
上一步反應(yīng)物 | 40 |
Splint Buffer | 15 |
Ligase | 5 |
Total | 60 |
3.使用移液器輕輕吹打或低速振蕩混勻，并短暫離心將反應(yīng)液離心至管底。
4. 將PCR管置于PCR儀上，按照表5所示攝制反應(yīng)程序，進(jìn)行單鏈環(huán)化反應(yīng)。
表5單鏈環(huán)化反應(yīng)程序
溫度 | 時(shí)間 |
熱蓋105°C | OFF |
37°C | 15min |
4°C | Hold |
★停止點(diǎn)1：環(huán)化反應(yīng)后產(chǎn)物，可置于-20℃儲(chǔ)存。
若是Input DNA類型為游離DNA文庫(kù)，可在此步驟停止；可取20 μl該步驟環(huán)化產(chǎn)物進(jìn)行下一步反應(yīng)。
3.3 酶切消化
1. 將表 6 中各試劑解凍后，顛倒混勻，置于冰上備用。
2. 于冰上配制表6所示反應(yīng)體系。
表6 酶切消化體系
名稱 | 體積（μL） |
上一步反應(yīng)物 | 60 |
Digestion Buffer | 8 |
Digestion Enzyme | 2 |
Total | 70 |
3. 使用移液器輕輕吹打或低速振蕩混勻，并短暫離心將反應(yīng)液離心至管底。
4. 將PCR管置于PCR儀上，按照表7的條件進(jìn)行反應(yīng)：
表7 酶切消化反應(yīng)程序
溫度 | 時(shí)間 |
熱蓋105°C | OFF |
37°C | 10 min |
4°C | Hold |
5. 反應(yīng)結(jié)束后，瞬時(shí)離心，立即進(jìn)行純化。
3.4 消化產(chǎn)物純化
該步驟使用磁珠對(duì)3.3步驟的產(chǎn)物進(jìn)行純化。
1. 準(zhǔn)備工作：將Hieff NGS® DNA Selection Beads或 Beckman AMPure XP Beads由冰箱中取出，室溫平衡至少30 min。配制80%乙醇。
2. 渦旋振蕩或充分顛倒磁珠以保證充分混勻。
3. 吸取120 μL Hieff NGS® DNA Selection Beads至消化產(chǎn)物中，室溫孵育10min。
4. 將PCR管短暫離心并置于磁力架中分離磁珠和液體，待溶液澄清后（約2 min），小心移除上清。
5. 保持PCR管始終置于磁力架中，加入500μL新鮮配制的80%乙醇漂洗磁珠，室溫孵育30 sec后，小心移除上清。
6. 重復(fù)步驟5，總計(jì)漂洗兩次。
7. 保持PCR管始終置于磁力架中，開(kāi)蓋空氣干燥磁珠至剛剛出現(xiàn)龜裂。
8. 將PCR管從磁力架中取出，加入22 μL TE Buffer，渦旋振蕩或使用移液器輕輕吹打至充分混勻，室溫靜置10 min。
9. 短暫離心，將 PCR 管始終置于磁力架中靜置，待溶液澄清后（約 2min），將上清小心移至新 PCR 管中。
★停止點(diǎn)2：環(huán)化純化產(chǎn)物，可置于-20℃儲(chǔ)存一個(gè)月。
3.4 消化產(chǎn)物質(zhì)控
使用Qubit® ssDNA Assay Kit熒光試劑對(duì)酶切消化產(chǎn)物進(jìn)行定量，具體請(qǐng)參見(jiàn)注意事項(xiàng)四。
HB190925
