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60210ES25Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素鹽酸鹽
| 參考價(jià): | 面議 |
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)- 60210ES25 產(chǎn)品型號(hào)
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠(chǎng)商性質(zhì)
- 上海市 所在地
訪(fǎng)問(wèn)次數(shù)：1279更新時(shí)間：2023-12-12 08:37:39
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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
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產(chǎn)品介紹
Puromycin Dihydrochloride嘌呤霉素鹽酸鹽
產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品描述
嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑鏈霉菌（Streptomyces alboniger）發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類(lèi)抗生素，通過(guò)抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽(yáng)性菌，各種動(dòng)物和昆蟲(chóng)細(xì)胞。某種特殊情況下有效作用大腸桿菌。作用機(jī)制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類(lèi)似物，能夠與核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素同A位點(diǎn)結(jié)合后，不會(huì)參與隨后的任何反應(yīng)，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。
嘌呤霉素產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶（PAC），賦予機(jī)體對(duì)嘌呤霉素產(chǎn)生抗性。這一特性如今普遍應(yīng)用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。
嘌呤霉素在細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選中的普遍應(yīng)用與慢病毒載體的特性有關(guān)，現(xiàn)在商業(yè)化的慢病毒載體多數(shù)都攜帶pac基因。在某些特定情況下，嘌呤霉素亦可以用來(lái)篩選轉(zhuǎn)化攜帶pac基因質(zhì)粒的大腸桿菌菌株。
產(chǎn)品性質(zhì)
CAS號(hào)（CAS NO.） | 58-58-2 |
分子式（Formula） | C22H29N7O5·2HCl |
分子量（Molecular weight） | 544.43 |
純度（Purity, HPLC） | ＞98% |
外觀(guān)（Appearance） | 白色至米白色粉末 |
結(jié)構(gòu)式（Structure） |
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運(yùn)輸和保存方法
冰袋運(yùn)輸。-20℃干燥保存，2年有效。
使用方法
1. 建議使用濃度
哺乳動(dòng)物細(xì)胞：1-10 μg/mL，///佳濃度需要?dú)缜€(xiàn)來(lái)確定；
大腸桿菌：LB瓊脂培養(yǎng)基篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)化pac基因的大腸桿菌，使用濃度為125 μg/mL。
【注】：使用嘌呤霉素篩選大腸桿菌穩(wěn)轉(zhuǎn)株需要精///確的pH值調(diào)節(jié)，而且受宿主細(xì)胞本身的影響。
2. 溶解方法
用蒸餾水溶解嘌呤霉素配制成50 mg/mL的母液，經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾除菌后分裝于-20℃凍存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/mL的儲(chǔ)存液。
3. 嘌呤霉素殺滅曲線(xiàn)的確定（以shRNA轉(zhuǎn)染或者慢病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)為例）
嘌呤霉素有效篩選濃度跟細(xì)胞類(lèi)型、生長(zhǎng)狀態(tài)、細(xì)胞密度、細(xì)胞代謝情況及細(xì)胞所處細(xì)胞周期位置等有關(guān)。為了篩選到穩(wěn)定表達(dá)的shRNA細(xì)胞株，確定殺死未轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的//低濃度嘌呤霉素至關(guān)重要。建議初次做實(shí)驗(yàn)的客戶(hù)一定要建立適合自身實(shí)驗(yàn)體系的殺死曲線(xiàn)（kill curve）。
1）Day 1：24孔板內(nèi)以5~8×104 cells/孔的密度鋪板，鋪?zhàn)銐蛄康目滓赃M(jìn)行后續(xù)的梯度實(shí)驗(yàn)。37℃細(xì)胞孵育過(guò)夜；
2）Day 2：①準(zhǔn)備篩選培養(yǎng)基：含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基（如0-15 μg/mL，至少5個(gè)梯度）；②往孵育過(guò)夜后的細(xì)胞內(nèi)更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基；之后37℃孵育細(xì)胞；
3）Day 4：更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀(guān)察細(xì)胞存活率。
4）根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，約2-3天更換新鮮的篩選培養(yǎng)基；
5）每日監(jiān)測(cè)細(xì)胞，觀(guān)察存活細(xì)胞率，從而確定抗生素篩選開(kāi)始4-6天內(nèi)有效殺死非轉(zhuǎn)染或所有非轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的藥物///低濃度。
4. 哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株的篩選
等轉(zhuǎn)染含有pac基因的質(zhì)粒后，細(xì)胞在含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基中增殖，以篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染子。
1）細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后，將細(xì)胞（原樣或稀釋?zhuān)┲糜诤羞m當(dāng)濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
【注】：當(dāng)細(xì)胞處于分裂活躍期時(shí)，抗生素作用///明顯。細(xì)胞過(guò)于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會(huì)明顯下降。建議進(jìn)行細(xì)胞分盤(pán)使其密度不超過(guò)25%。
2）每隔2-3天，移除和更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。
3）篩選7天后評(píng)估細(xì)胞形成的病灶。病灶可能需要額外的一周或者更多時(shí)間，這依賴(lài)于宿主細(xì)胞系和轉(zhuǎn)染篩選效率。
【注】：每日進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的觀(guān)察。嘌呤霉素的篩選至少需要48 h，有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在3-10天。
4）轉(zhuǎn)移和放置5-10個(gè)抗性克隆到一個(gè)35 mm的培養(yǎng)皿中，用選擇培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)7天。此次富集培養(yǎng)是為日后的細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。
注意事項(xiàng)
1）嘌呤霉素為有毒化合物，操作時(shí)請(qǐng)小心拿放；
2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
HB180517
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