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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 8 T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 12608ES24 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module 快速末端修復/A尾添加模塊 | 12608ES24 | 24 T | 3865.00 |
12608ES96 | 96 T | 11765.00 |
產品描述
Hieff NGS® Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Module是針對Illumina®高通量測序平臺文庫構建而專業設計的DNA末端修復/A尾添加模塊，具有高效、快速、易實現自動化的優勢。本產品兼容1 ng-1 μg片段化Input DNA，可在單管內實現片段化DNA的末端補平、5'端磷酸化和3'端加A尾反應，得到5'末端含磷酸基團且3'末端帶有dA突出的DNA產物。該產物無需純化，即可使用Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）進行文庫構建接頭連接反應。
本產品已與Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607），2×Hieff Canace®Ⅱ High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12620）共同用于DNA文庫構建，通過Illumina®高通量平臺測序驗證其有效性。本產品中提供的所有試劑組分均經過嚴格質檢，最高程度保障產品優異性能與批間穩定性。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 24 T | 96 T |
12608-A | End Repair/dA-Tailing Buffer | 144 μL | 576 μL |
12608-B | End Repair/dA-Tailing Enzyme | 96 μL | 384 μL |
質量控制
Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Enzyme
1. SDS-PAGE純度：>95%。
2. 核酸內切酶活性：50 μL反應體系中加入10 μL本酶和1 μg φX174 RF I DNA，37°C孵育4小時。經瓊脂糖凝膠電泳檢測,RF II轉化比率<10%。
3. 磷酸酶活性：在磷酸酶活性檢測緩沖液中加入10 μL本酶和2.5 mM對硝基苯磷酸，37°C孵育4小時。經光譜測定法檢測，405 nm處無對硝基苯陰離子特征吸收峰。
4. 功能活性：在1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Enzyme中加入1 μL本酶和0.5 μg包含5'和3'突出末端的片段化DNA，25°C孵育20分鐘。經毛細管電泳檢測，末端修復、加dA尾并磷酸化的DNA比率>95%。
Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer
1. 16小時孵育檢測：50 μL反應體系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg HindIII-λDNA，37°C孵育16小時。經瓊脂糖凝膠電泳檢測，條帶無降解；50 μL反應體系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg T3 DNA，37°C孵育16小時。經瓊脂糖凝膠電泳檢測，條帶無降解。
2. 核酸內切酶活性：50 μL反應體系中包含1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和1 μg φX174 RF I DNA，37°C孵育4小時。經瓊脂糖凝膠電泳檢測，RF II轉化比<10%。
3. RNase活性：在1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer中加入40 ng FAM-RNA，37°C孵育16小時。經聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測，條帶無降解。
4. 磷酸酶活性：在磷酸酶活性檢測緩沖液中加入1×Fast-Pace End Repair/dA-Tailing Buffer和2.5 mM對硝基苯磷酸，37°C下孵育4小時。經光譜測定法檢測，405 nm處無對硝基苯陰離子特征吸收峰。
測序驗證
本品與Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607），2×Hieff Canace® High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12620）共同用于DNA文庫構建，已通過Illumina®高通量平臺測序驗證其有效性。
運輸與保存方法
冰袋運輸。
-20℃保存，有效期1年。
注意事項
為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1. 將表1中各試劑解凍后，顛倒混勻，置于冰上備用。
2. 于無菌PCR管中配制表1所示反應體系。
表1 末端修復/dA尾添加PCR反應體系
名稱 | 體積（μL） |
Fragmented DNA | x |
End Repair/dA-Tailing Buffer | 6 |
End Repair/dA-Tailing Enzyme | 4 |
ddH2O | Up to 60 μL |
3. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應液離心至管底。
4. 將上述PCR管置于PCR儀，設置表2所示反應程序，進行末端修復/dA尾添加反應。
表2 末端修復/dA尾添加PCR反應程序
溫度 | 時間 |
熱蓋105°C | On |
30°C | 20 min |
72°C | 20 min |
4°C | Hold |
5. 產物如需純化，可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效產品。
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