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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 生物產業 |
|---|
產品介紹
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
XL10-Gold Chemically Competent Cell XL10-Gold化學感受態細胞 | 11810ES80 | 100 μl×10管 | -80℃ | 287 |
產品描述
XL10-Gold化學感受態細胞是經特殊工藝處理得到的感受態細胞，特別適合于大分子量DNA的高效轉化。具有四環素和氯霉素抗性，使用Puc19質粒測得其轉化效率達108cfu/μg，主要具有如下特點：
① Hte表型可增強較大分子量質粒和連接產物的高效轉化；
② 具有限制性內切酶缺陷性，更利于克隆 DNA 的穩定和高純度質粒 DNA 的提??；
③ 更適于質粒文庫的構建；
④ 具有lacIqZΔM15，可用于藍、白斑篩選。
本品基因型：
TetrΔ(mcrA)183Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F′proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr) Amy Camr]。
產品組分
編號 | 組分 | 規格 | 保存溫度 |
11810-A | XL10-Gold化學感受態細胞 | 100 μl × 10 | -80℃ |
11810-B | pUC19（10pg/μl） | 10 μl × 1 | -20℃ |
運輸與保存方法
干冰運輸。
XL10-Gold化學感受態細胞-80℃保存，pUC19質粒-20℃保存。有效期半年。不能保存于液氮！
注意事項
1）感受態細胞應保存在-80℃，不可反復凍融和放置時間過長，以免降低感受態細胞的轉化效率。
2）整個轉化操作，嚴格根據相應溫度及無菌條件要求進行。
3）為確保zui高轉化效率，整個操作過程應盡量輕柔，并保持低溫，且每次轉化感受態使用量，不低于100μl。
4）為防止轉化不成功，可以保留部分連接反應液，以重新轉化，zui低化實驗可能遇到的風險。
使用方法
1）取100 μl感受態細胞置于冰浴中融化。
2）向100μl感受態細胞懸液中加入0.1-50ng（＜10μl /100μl感受態）目的DNA或2μl連接產物，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，在冰浴中靜置30min。
3）置于42℃水浴中熱激30s，然后快速將管轉移到冰浴中，冷卻2-3min，該過程不要搖動離心管，否則會降低轉化效率。
4）向離心管中加入900μl 42℃預熱的無菌NZY+培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床振蕩培養1h（225-250rpm），目的是促使菌體復蘇。
【注】：此步也可用LB培養基（不含抗生素）進行菌體復蘇。
5）取上述≤200μl轉化產物涂至含有相應抗生素的LB固體平板上，將平板倒置放于37℃培養箱培養一個晚上。
【注】：如需做藍白斑篩選，需至少孵育17h，以充分顯色。
附錄一：常用抗生素工作濃度
抗生素 | 翊圣貨號 | 常用工作濃度 |
Ampicillin 氨芐青霉素 | 60203ES10 | 100 μg/ml |
Carbenicillin羧芐青霉素 | 60202ES08 | 100 μg/ml |
Chloramphenicol 氯霉素 | 60205ES10 | 33 μg/ml |
Kanamycin 卡那霉素 | 60206ES10 | 30 μg/ml |
Streptomycin 鏈霉親和素 | 60211ES60 | 25 μg/ml |
Tetracycline 四環素 | 60212ES25 | 15 μg/ml |
附錄二 NZY+培養基配方
10 g of NZ amine (casein hydrolysate)
5 g of yeast extract
5 g of NaCl
Add deionized H2O to a final volume of 1 liter
Adjust to pH 7.5 using NaOH and then autoclave
Add the following filer-sterilized supplements prior to use:
12.5 ml of 1 M MgCl2
12.5 ml of 1 M MgSO4
20 ml of 20% (w/v) glucose (or 10 ml of 2 M glucose)
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