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HiSep DEAE Agarose Resin 6FF

DEAE弱陰離子高速交換樹脂

產品信息

產品描述

離子交換樹脂主要包括強酸性陽離子交換樹脂、弱酸性陽離子交換樹脂、強堿性陰離子交換樹脂和弱堿性陰離子交換樹脂4種，廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質、核酸及多肽的分離純化。

本品DEAE弱陰離子交換樹脂以高度交聯的6%瓊脂糖為介質，可耐受較高的流速及更高的化學穩定性，適合實驗室及工業大規模純化。本品離子交換基團-O-CH2CH2-N (C2H5)2。

產品性質

運輸和保存方法

冰袋運輸。4℃保存，有效期2年。

使用方法

1 緩沖液的準備

所用水和Buffer在使用前用0.22µm或0.45µm濾膜過濾。

2 樣品準備

樣品在使用前用0.22µm或0.45µm濾膜過濾，減少雜質，提高蛋白純化效率和防止堵塞柱子。

3 裝柱（使用儲液器裝填）

1）用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭，確保柱底篩板上無氣泡，關閉柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去離子水。

2）將樹脂懸浮起來，小心的將漿液連續地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產生。

3）如果使用儲液器，應立即在層析柱和儲液器中加滿水，將進樣分配器放置于漿液表面，連接至泵上，避免在分配器或進樣管中產生氣泡。

4）打開層析柱底部出口，開起泵，使其在設定的流速下進行。zui初應讓緩沖液緩慢流過層析柱，然后緩慢增加至zui終流速， 這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊，也可以避免柱床形成的不均勻。如果達不到推薦的壓力或流速，可以用你所使用泵的zui大流速， 這樣也可以得到一個很好的裝填效果（【注】：在隨后的色譜程序中，不要超過zui大裝柱流速的75%）。當柱床高度穩定后，在zui后的裝柱流速下至少再上3倍柱床體積的去離子水。標上柱床高度。

5）關閉泵，關閉層析柱出口。

6）如果使用儲液器，去除儲液器，將分配器至于層析柱中。

7）將分配器推向柱子至標記的柱床高度處。允許裝柱液進入分配器，鎖緊分配器接頭。

8）將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統中，開始平衡。如果需要可以重新調整分配器。

4 樣品純化

1）將介質裝入合適的層析柱，層析用5倍柱體積的結合Buffer進行平衡，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。

2）將樣品加到平衡好的HiSep DEAE Agarose Resin 6FF中（保證目的蛋白與Resin充分接觸，提高目的蛋白的回收率），收集流出液。

3）用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。

4）使用5-10倍柱體積的洗脫Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。

5）依次使用3倍柱體積的結合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，zui后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被細菌污染。

5  SDS-PAGE 檢測

將得到的樣品（包括流出組分、洗雜組分和洗脫組分）以及原始樣品使用SDS-PAGE 檢測純化效果。

6 填料清洗

離子交換樹脂每次使用后可以用1M NaCl 甚至更高離子強度溶液或高pH溶液清洗，然后用至少5倍柱體積的Buffer 進行平衡至離子強度或pH值穩定。

CIP（Cleaning In Place）清洗

離子交換樹脂可以重復使用而無需再生，但隨著非特異性結合的蛋白的增多和蛋白的聚集，往往造成流速和結合載量都下降，這時可按照下面方法對樹脂進行清洗。

1）去除一些沉淀或變性物質

用2倍柱體積的1M NaOH 溶液進行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。

2）去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質

用3-4倍柱體積的70%乙醇或3-4倍柱體積的1% Triton™ X-100 清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH7.4清洗。

3）去除一些離子鍵結合物質

用3-4倍柱體積的2M NaCl清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS, pH 7.4清洗。

注意事項

1）請勿冷凍保存本產品。

2）Resin使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。

3）所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

附表 問題及解決方案

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