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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 20401ES60 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 生物產業 |
翌圣重組腸激酶為采用重組大腸桿菌分泌表達的高純度、高活性、高特異的牛腸激酶，不含其他蛋白酶，可以在較寬pH范圍
產品介紹
產品簡介
重組腸激酶（rEK）是一種高純度的重組牛腸激酶輕鏈片段，氨基酸序列與牛腸激酶輕鏈一致，有著和天然提取的腸激酶同樣特異的酶切位點，切割位點Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合標簽，同時重組腸激酶（rEK）具有比天然酶更高的切割活性。
翌圣重組腸激酶為采用重組大腸桿菌分泌表達的高純度、高活性、高特異的牛腸激酶，不含其他蛋白酶，可以在較寬pH范圍（4.5-9.5）和較寬溫度范圍內有效切割融合蛋白，并且在各種去垢劑和變性劑存在的條件下仍具有部分活性。本品不含標簽，由于具有 酶切活性，酶切反應使用量少，不影響下游蛋白應用，可不考慮除去。
產品信息
貨號 | 20401ES60 / 20401ES70 / 20401ES76 / 20401ES80 / 20401ES90 |
規格 | 100 U / 200 U / 500 U / 1000 U / 5000 U |
產品性質
來源（Source） | 大腸桿菌表達 |
分子量（Molecular Weight） | 理論值25.85 kDa |
外觀（Appearance） | 澄清、無色至淡黃色液體 |
酶濃度（Enzyme Concentration） | ≥5 U/uL |
活性定義（Activity Definition） | 一個活性單位定義為25°C，12-16 h，在25 mM Tris-HCl，Ph 8.0緩沖體系下，將500 μg帶有腸激酶酶切位點的融合蛋白切開95%所需要的酶量 |
內毒素檢測（Endotoxin） | 用LAL法測定內毒素含量小于1 EU/μg |
質量保證（Quality assurance） | 經多次柱純化，SDS-PAGE膠檢測僅可見清晰單一的目的條帶；不含其他蛋白酶，無非特異性切割 |
緩沖體系（Buffer） | 50 mM Tris-HCl，pH8.0，250 mM NaCl，2 mM Ca 2+，50%甘油 |
儲存條件
-25~-15℃保存，有效期2年。盡量避免反復凍融（5次以內，無活性損失）
使用方法（應用舉例）
【注】該酶效力高且待切蛋白結構性質不同，建議先進行預實驗摸索酶使用濃度及酶切反應時間。
1）反應體系
融合蛋白 | 0.05-0.1 mg（蛋白濃度：0.1-1 mg/mL） |
Enterokinase | 0.1-0.2 U |
緩沖體系 | 25 mM Tris-HCL 8.0 |
2）反應條件：25°C過夜酶切（注： 酶切需要16-24 h）。
【注】重組腸激酶可使用25 mM Tris-HCl pH 8.0稀釋成每1 μL含0.1 U的溶液使用。
4°C低溫酶切條件：4°C能對底物進行有效酶切，但需要延長酶切時間至48-64 h 或者增加2-3倍酶量。
注意事項
本產品所講述的緩沖體系需要自行配置。
不建議37℃條件下酶切，可能會有非特異性酶切出現。
在＞200 mM咪唑，或＞200 mM NaCl，或＞5%甘油，酶切會受到影響。如果樣品溶液中含有上述成分的一種或多種，為獲得理想的酶切結果，請先將樣品透析到25 mM Tris-HCl 8.0緩沖液中，然后再進行酶切實驗；若不方便透析，可將樣品稀釋到咪唑含量在100 mM以下，NaCl濃度在50 mM以下，甘油濃度小于5%以下進行酶切，酶的用量與蛋白比例不變；若干擾因素很多，且不便去除，需要適當增加酶量或延長酶切時間，有助于得到理想的酶切效果。
磷酸鹽對Enterokinase有很強的抑制作用，痕量的磷酸鹽都會嚴重影響Enterokinase的活性，因此在酶切體系內不能存在磷酸鹽。
本品是具有高酶活力重組腸激酶，切割蛋白使用量少，可不考慮除去。后續如需去除重組腸激酶，可用陰離子交換樹脂（如DEAE-FF）對其進行洗脫。推薦洗脫條件如下：
平衡緩沖液：25 mM Tris-HCl pH 8.0
洗脫緩沖液：25 mM Tris-HCl pH 8.0，含100 mM NaCl
6. 蛋白酶切效果不好，可適當增加酶量，或適當延長酶切時間。
7. 本產品僅作科研用途。
8. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
