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MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF

MBP標簽蛋白高度交聯純化樹脂

產品信息

產品描述

MBPSep Dextrin Agarose Resin是一種純化帶有麥芽糖結合蛋白（MBP）標簽蛋白的親和層析介質，MBP可促進連接蛋白的正確折疊，增加在細菌中過量表達的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步純化MBP融合蛋白，結合的融合蛋白可以用10mM麥芽糖進行溫和洗脫，保護了目的蛋白的活性，MBP融合部分后續可用位點特異性蛋白酶切除。

此外，本品以高度交聯的6%瓊脂糖凝膠為基質，具有更高的物理化學特性，可以耐受更高的壓力，在相對較高的流速下，實現對目的蛋白的純化，更適于工業大規模蛋白的純化。

產品性質

運輸和保存方法

冰袋運輸。4℃保存，有效期2年。

需準備試劑

所用水和Buffer在使用前用0.22μm或0.45μm濾膜過濾除菌。

結合/洗雜緩沖液：20 mM Tris-HCl, 200mM NaCl, 1mM EDTA, pH7.4

洗脫緩沖液：20mM Tris-HCl, 1mM EDTA，10mM 麥芽糖, pH7.4

【注】：結合/洗雜緩沖液或者洗脫緩沖液中可加入1mM DTT或10mM β-巰基乙醇。

使用方法

【注】樣品在上樣前用0.22μm或0.45μm濾膜過濾，減少雜質以防阻塞柱子。

1 MBPSep Dextrin Agarose Resin的裝填（適用于各種中壓色譜層析柱的填裝）

1）用去離子水沖洗層析柱底篩板與接頭，確保柱底篩板上無氣泡，關閉柱底出口，并在柱底部留出1-2cm的去離子水。

2）將樹脂懸浮起來，小心的將漿液連續地倒入層析柱中。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產生。

3）如果使用儲液器，應立即在層析柱和儲液器中加滿水，將進樣分配器放置于漿液表面，連接至泵上，避免在分配器或進樣管中產生氣泡。

4）打開層析柱底部出口，開起泵，使其在設定的流速下進行。zui初應讓緩沖液緩慢流過層析柱，然后緩慢增加至zui終流速， 這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊，避免柱床形成的不均勻。如果達不到推薦的壓力或流速，可以用所使用泵的zui大流速，這樣也可以得到一個很好的裝填效果。

【注】：在隨后的色譜程序中，不要超過zui大裝柱流速的75%，當柱床高度穩定后，在zui后的裝柱流速下至少再上3倍柱床體積的去離子水。標上柱床高度。

5）關閉泵，關閉層析柱出口。

6）如果使用儲液器，去除儲液器，將分配器至于層析柱中。

7）將分配器推向柱子至標記的柱床高度處。允許裝柱液進入分配器，鎖緊分配器接頭。

8）將裝填好的層析柱連接至泵或色譜系統中，開始平衡。如果需要可以重新調整分配器。

2 樣品純化

1）平衡：用5倍柱體積的結合Buffer平衡柱子，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。

2）上樣：Resin平衡后，加入蛋白樣品，使其與Resin充分接觸，提高目的蛋白回收率，收集流出液。

3）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜緩沖液進行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。

4）洗脫：使用5-10倍柱體積的洗脫緩沖液，收集洗脫液，即目的蛋白溶液。

5）清洗與保存：依次使用3倍柱體積的結合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，zui后用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%乙醇中，置于4℃保存，防止填料被細菌污染。

3 SDS-PAGE檢測

將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進行檢測，判定其純化效果。

4 填料清洗

隨著非特異結合蛋白的增多和蛋白的聚集，會造成流速和結合載量性能下降，此時需對填料進行清洗。

1）3倍柱體積的去離子水；

2）3倍柱體積的0.1%SDS或0.5M NaOH溶液；

3）3倍柱體積去離子水；

4）3倍柱體積20%乙醇，保存于4℃。

注意事項

1）請勿冷凍保存本產品。

2）MBPSep Dextrin Agarose Resin6FF使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。

3）所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。

4）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

附表 問題及解決方案

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