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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
產品介紹
Protein A 4FF Chromatography Column, 1ML
蛋白A純化預裝柱，1ML
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
Protein A 4FF Chromatography Column, 1ML 蛋白A純化預裝柱，1ML | 36409ES03 | 1ml | 4℃ | 528.00 |
Protein A 4FF Chromatography Column, 1ML 蛋白A純化預裝柱，1ML | 36409ES08 | 5×1ml | 4℃ | 2218.00 |
產品描述
天然蛋白A（Protein A）是一種發現于金黃色葡萄球菌的細胞壁表面蛋白，與分離自G型或C型鏈球菌屬的蛋白G類似，主要通過與免疫球蛋白（Ig）的Fc區相互作用，結合大多數哺乳動物的IgG，可用于多種抗體（單抗和多抗）的分離純化。在與不用的免疫球蛋白亞類的結合特性上，ProteinA 和Protein G結合性能不太一樣（詳見附錄1）。
本品使用的是基因改造后的蛋白A，不僅維持其本身的Ig親和特性，同時也去除了天然蛋白本身的非主要結合域以降低非特異性結合，Protein A Agarose Resin 4FF以高度交聯的瓊脂糖凝膠為基質，重組Protein A為配基，具有很高的物理化學穩定性，可以在相對較高的流速下進行抗體的純化，適用于工業客戶。利用本品經過一步親和層析，即可從腹水、血清和培養液等樣品中得到高純度的抗體，使用方便，應用廣泛。
本品Protein A 4FF Chromatography Column，1ml是一種裝填了Protein A Agarose Resin 4FF的中壓預裝柱，規格1ml，預裝柱具有標準接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統，如?KTA 等，方便客戶操作。
產品性質
基質（Matrix） | 高度交聯的4%瓊脂糖微球 |
配體（Ligand） | 重組蛋白A |
孔徑（Bead size） | 45-165μm |
zui大流速（Flowmax） | 0.3MPa,3bar |
儲存緩沖液（Buffer） | 含20%乙醇的1×PBS |
載量（Capacity） | ＞40mg human IgG/ml 基質 |
pH范圍（pH range） | 3-12 |
運輸與保存方法
冰袋運輸。4℃保存，2年有效。
需準備試劑
【注】：建議以下緩沖液在使用前用0.22μm或0.45μm濾膜過濾。
結合/洗雜緩沖液：0.15M NaCl, 20mM Na2HPO4, pH7.0
洗脫緩沖液：0.1M甘氨酸，pH 3.0
中和液：1M Tris-HCl，pH 8.5
使用方法
【注】：上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強度和pH值，可以用結合/洗滌緩沖液對血清樣品、腹水或細胞培養液稀釋，或者樣品用結合/洗滌緩沖液透析。
1樣品純化（以Akta系統為例）
1）準備：將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統中。再折斷下口，將預裝柱接到色譜系統中，并旋緊。
2）清洗：3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲存液。
3）平衡：用5倍柱體積的結合Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。
4）上樣：將樣品加到平衡好的層析柱中，推薦流速1ml/min，保證目的蛋白與樹脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測。
【注】：樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會導致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進樣器更難使用。
5）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進行清洗，直到紫外吸收達到一個穩定的基線，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。
6）洗脫：用洗脫Buffer 采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液足夠將目的蛋白洗脫下來。也可以用一個小的梯度，例如20倍柱體積或更多，來分離不同結合強度的蛋白質。
7）清洗及保存：依次使用3倍柱體積的結合Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，zui后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4度保存，防止填料被細菌污染。
2 SDS-PAGE檢測
將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進行檢測，判定其純化效果。
3 樹脂清洗
隨著一些變性物質的沉淀和蛋白的聚集，往往造成流速和結合載量下降，影響柱子的性能，這時需對柱子進行清洗：
1）去除沉淀或變性物質
① 用2倍柱體積的6M 鹽酸胍溶液進行清洗；
② 用5倍柱體積的PBS，pH 7.4 清洗。
2）去除由于疏水性吸附造成的非特異吸附物質
① 用3-4倍柱體積的70%乙醇或2倍柱體積的1% Triton? X-100清洗；
② 用5倍柱體積的PBS, pH 7.4 清洗。
注意事項
1）請勿冷凍保存本產品。
2）所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。
3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
附錄1. 蛋白A，G對不同物種Ig的結合能力總表
免疫球蛋白亞型 | Protein A | Protein G | 免疫球蛋白亞型 | Protein A | Protein G |
Human IgG | ++++ | ++++ | Mouse IgG | ++++ | ++++ |
Human IgG1 | ++++ | ++++ | Mouse IgG1 | + | ++++ |
Human IgG2 | ++++ | ++++ | Mouse IgG2a | ++++ | ++++ |
Human IgG3 | + | ++++ | Mouse IgG2b | +++ | +++ |
Human IgG4 | ++++ | ++++ | Mouse IgG3 | ++ | +++ |
Human IgM | Use anti-Human IgM | Mouse IgM | Use anti-Mouse IgM | ||
Human IgE | NR | NR | Chicken IgG (IgY) | NR | NR |
Human IgA | + | NR | Cow IgG | ++ | ++++ |
Human IgA1 | + | NR | Goat IgG | + | ++++ |
Human IgA2 | + | NR | Goat IgG1 | + | ++++ |
Human IgD | Use anti-Human IgD | Goat IgG2 | ++++ | ++++ | |
Rat IgG | + | ++ | Goat IgM | NR | NR |
Rat IgG1 | NR | + | Guinea Pig IgG | ++++ | ++ |
Rat IgG2a | NR | ++++ | Guinea Pig IgG1 | ++++ | ++ |
Rat IgG2b | NR | + | Guinea Pig IgG2 | ++++ | ++ |
Rat IgG3 | + | ++ | Hamster IgG | + | ++ |
Sheep IgG | + | ++ | Horse IgG | + | ++++ |
Sheep IgG1 | + | ++ | Rabbit IgG | ++++ | +++ |
Sheep IgG2 | + | ++ | Rabbit IgM | NR | NR |
Sheep IgM | NR | NR | Rabbit All isotypes | +++ | ++ |
Pig IgG | +++ | +++ | Monkey IgG | ++++ | ++++ |
Cat IgG | ++++ | + | Donkey IgG | ++ | ++++ |
Dog IgG | ++++ | + | |||
(+)= weak binding; (++)= moderate binding; (++++)= strong binding; NR= not recommended; (-)= not tested; | |||||
附錄2 常見問題與解答
問題 | 可能原因 | 推薦解決方法 |
柱子反壓過高 | 填料被堵塞 | 清洗填料 |
裂解液中含有微笑的固體顆粒，建議上柱前使用0.22μm/0.45μm濾膜過濾。 | ||
樣品純化過程中曲線不穩 | 樣品或 buffer 中有氣泡 | 趕出氣泡 |
樣品和buffer進行脫氣 | ||
洗脫組分中沒有目的蛋白 | 樣品中抗體濃度太低 | 使用其抗原做配體的介質 |
抗體被降解 | 適當的提高洗脫pH | |
樣品與Protein A結合力低 | 換用Protein G或Protein A/G樹脂純化 | |
回收率逐漸減低 | 上樣量太多 | 減少上樣量 |
柱子太臟，載量降低 | 清洗樹脂 |
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