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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50 μg |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 40704ES50 | 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
Fluo-4, AM, Cell Permeant 細胞膜可滲透鈣離子熒光探針
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 價格（元） |
Fluo-4, AM, Cell Permeant 細胞膜可滲透鈣離子熒光探針 | 40704ES50 | 50 μg | 276.00 |
Fluo-4, AM, Cell Permeant 細胞膜可滲透鈣離子熒光探針 | 40704ES72 | 5×50 μg | 976.00 |
Fluo-4, AM, Cell Permeant 細胞膜可滲透鈣離子熒光探針 | 40704ES80 | 1 mg | 2576.00 |
產品描述
細胞生物學實驗中常使用Fluo-3, AM作為一種熒光探針來檢測細胞內鈣離子濃度變化。Fluo-4,AM鈣離子熒光探針其檢測原理基于Fluo-3,AM可穿透細胞膜進入細胞，之后被細胞內的酯酶剪切形成Fluo-3，從而被滯留在細胞內。Fluo-3游離配體幾乎是非熒光性的，其熒光不會隨鈣離子濃度升高而增強。但是，當它與細胞內鈣離子結合后可以產生較強的熒光，熒光會增加60至80倍。
Fluo-4,AM鈣離子熒光探針是鈣指示劑Fluo-3,AM的升級版本，主要變化為后者分子上的兩個氯原子被Fluo-4,AM上的氟所取代，該結構上的微小變化使Fluo-4,AM加載更快，在相同濃度下檢測信號更強。
本產品為Fluo-4,AM粉末狀，用于細胞內鈣離子檢測時，Fluo-4, AM的常用濃度為0.5-5 μM。
產品性質
CAS 號（CAS NO.） | 273221-67-3 |
分子式（Molecular Fomular） | C51H50F2N2O23 |
分子量（Molecular Weight） | 1096.94 |
Ex/Em (nm) | Ex/Em=494 nm/516 nm |
純度（Purity） | ≥90% |
外觀（Appearance） | 橙紅色粉末 |
結構式（Structure） |
|
運輸與保存方法
室溫（wet ice）運輸。-20℃干燥避光保存，有效期至少6個月。
注意事項
1）熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
2）本Fluo-4,AM 容易吸潮，從冰箱取出后，請確認在干燥的環境放至室溫后再開封。由于試劑極其微量，開封前請將其短暫離心，以保證粉末落入管底。
3）*次使用時，建議母液即配即用。試劑溶解后盡可能在短時間內使用，以保證實驗效果。
4）母液遇水極易分解，如果不能一次用完，建議分裝保存，例如分裝成5 μl/管，用封口膜封口，并用鋁箔紙包裹，放在一個密閉性能好的塑料袋中，并放入一包干燥劑，在≤-20℃密封避光保存。
5）建議您在正式實驗前先摸索一下細胞量、鈣離子熒光探針的終濃度、培養時間等，找到*實驗條件。
6）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
需要試劑準備
1. （可選）配制Pluronic F-127母液：100mg Pluronic F-127粉末（Cat No. 60318ES60）中加入0.5 mL DMSO，配制成20%(w/v)的DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30 min。溶液室溫保存，不要冷藏。如果有結晶析出，可以重新加熱后溶解，不影響使用。
2. Hanks•balanced salt solution
操作方法
1）Fluo-4,AM母液的配制：向 Fluo-4, AM中加入適量DMSO，配制成1-5 mM的儲存液，DMSO的加入量根據Fluo-4,AM（MW1096.94）分子量進行計算（如：若配制成1mM的母液，需向50 ug Fluo-4,AM中加入45.6 uL DMSO）。
【注】：溶解用的DMSO需要保證新鮮無水，否則將會導致 AM 體水解，使熒光染料無法進入細胞，影響實驗效果。
2）Fluo-4,AM工作液的配制：利用HBSS將Fluo-4,AM稀釋成1-5µM的工作液，具體稀釋方法如1 mM母液配制1 mL濃度為4 µM工作液，用1 mL HBSS溶液稀釋4 µL 1 mM母液即可。
【注】：① 推薦該探針加載濃度在4-5 µM，具體的使用濃度需根據實驗要求進行優化。為了避免過度加載造成細胞毒性，建議在取得有效結果的基礎上盡量使用低探針濃度。
② Fluo-4,AM工作液需現配現用，避免反復凍存。
3）（可選）如果Fluo-4進入細胞的效果不好，可向 Fluo-4, AM/DMSO 溶液中加入適量20% Pluronic F127溶液，終稀釋至其終濃度為0.04-0.05%，Pluronic F127 可以防止 Fluo-4, AM 在 HBSS中聚合并能幫助其進入細胞。
【注】：Pluronic F127可降低Fluo-4,AM的穩定性，因此只建議在配制工作液時加入，不建議將其加入儲存液長期保存。
4）取出預培養的細胞，除去培養基，使用 HBSS 溶液洗滌細胞 3次。
【注】：如果使用含血清的培養基，血清中的酯酶會分解 AM 體，從而降低 Fluo 4-AM 進入細胞的效果。另外含有酚紅的培養基會使本底值略微偏高，所以加工作液之前需盡量去除培養基殘留。
5）將 Fluo-4, AM工作液加入細胞，加入量以覆蓋細胞為準。在37℃培養10-60 min，然后除去 Fluo 4-AM 工作液。
【注】：關于孵育的時間，如果*做實驗不能確定，建議先孵育30分鐘，看熒光效果：如果細胞死亡較多，適當縮短時間；如果熒光強度太弱，適當延長時間。
6）用HBSS溶液洗滌細胞 3 次，以充分去除殘留的 Fluo 4-AM 工作液。然后加入 HBSS 溶液覆蓋細胞。
7）37℃培養箱孵育約 20-30 分鐘，以確保 AM 體在細胞內的*去酯化作用。
8）用激光共聚焦或熒光顯微鏡檢測細胞，激發波長 494 nm，發射波長 516 nm。
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