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Phleomycin (20mg/ml in solution) 腐草霉素

產品信息

產品描述

Phleomycin，中文名腐草霉素，由Streptomyces verticillus（輪枝鏈霉菌）的突變株產生的一種糖肽抗生素，屬于博來霉素(bleomycin)家族。抑菌機制在于腐草霉素可結合并插入DNA，從而破壞其雙螺旋結構的完整性。腐草霉素對大多數細菌、真菌、酵母、植物細胞和哺乳動物細胞都有活性，尤其適用于對Zeocin^TM敏感性低的細胞，如酵母菌和絲狀真菌。

腐草霉素是分子遺傳學研究中的選擇性抗生素之一，可用于篩選攜帶Sh ble基因的轉染細胞。Sh ble基因來源于Streptoalloteichus hindustanus，其可編碼一種14kDa的蛋白，該蛋白可與腐草霉素強烈結合從而抑制其切割DNA鏈的活性。腐草霉素是由多種結構類似物構成的復合物，這些復合物僅僅在末端胺基有所差異。另外，因屬于銅離子螯合的復合物，溶液呈藍色。

本品以20mg/ml的無菌溶液形式提供，可直接用于細胞培養，在0.1-50μg/ml濃度范圍內，腐草霉素可以抑制大多數好氧細胞的生長。

產品性質

運輸與保存方法

冰袋運輸。

4°C或-20°C保存。4°C穩定保存12個月，-20°C可穩定保存18個月。避免反復凍融。

操作方法

【注1】細胞對腐草霉素的敏感性受pH值影響，如pH值越高，敏感性越高；另外，對于高滲透壓培養基如原生質體再生用的培養基，腐草霉素的活性會明顯降低2-3倍。因此也可能通過使用低鹽培養基來降低腐草霉素使用量。

【注2】使用前需將低溫存放的腐草霉素置于室溫回溫，之后低速充分混勻。

1 大腸桿菌

攜帶bleomycin抗性基因如Sh ble，Tn5的質粒，一旦轉化進入大腸桿菌受體菌如HB101， DH5a， MC1061，賦予其腐草霉素抗性。

腐草霉素抗性的轉化子可以在添加5 μg/ml Phleomycin的低鹽LB瓊脂培養基（Yeast extract 5g/L, Tryptone 10g/L, NaCl 5g/L, Agar 15 g/L, pH 7.5）中進行篩選。加有腐草霉素的平板可于4℃穩定保存1個月。

2 酵母菌

釀酒酵母的腐草霉素抗性轉化子可在添加10 μg/ml Phleomycin的YEPD培養基中進行篩選。

操作步驟：按常規方法進行酵母細胞轉化，一旦DNA進入細胞后，用YEPD培養基稀釋細胞并置于搖床上培養6h或過一個晚上，使其抗性性狀得以表達。之后將細胞冰浴1h并涂布培養在添加10 μg/ml Phleomycin的YEPD（pH 7.0）固體培養基上。

3 真菌

根據轉化子對Phleomycin 的敏感性不同，在添加有10-50 μg/ml腐草霉素的再生培養基內進行篩選。先將細胞在4℃孵育過一個晚上然后置于生長溫度培養，可提高其對抗生素的敏感性。

4 植物細胞

根據植物類型不同，選擇5-25 μg/ml Phleomycin進行轉化子篩選。

5 哺乳動物細胞

5-50 μg/ml Phleomycin，推薦先通過建立滅殺曲線來確定*濃度。與G418做比較，可能需要更長的時間來殺死細胞或者使細胞從平板上脫落，尤其當細胞處于高密度的情況。

依細胞系不同，通常需要5~21天來挑選具腐草霉素抗性的穩定轉染細胞。

注意事項

1）腐草霉素對濃酸較為敏感，但可短時間暴露于稀酸中。使用前將本品回溫至室溫，并輕輕混勻。

2）腐草霉素有毒，避免直接接觸皮膚，不可吞服。酸性或堿性pH，或次磷酸鈉中會即刻失效。

3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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