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- 60217ES20 產(chǎn)品型號
- Yeasen/翌圣生物 品牌
- 生產(chǎn)商 廠商性質(zhì)
- 上海市 所在地
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Phleomycin (20mg/ml in solution) 腐草霉素
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品編號 | 規(guī)格 | 儲存 | 價格(元) |
Phleomycin (20mg/ml in solution) 腐草霉素 | 60217ES20 | 20mg | -20°C~+4°C | 838.00 |
Phleomycin (20mg/ml in solution) 腐草霉素 | 60217ES60 | 5×20mg | -20°C~+4°C | 3328.00 |
產(chǎn)品描述
Phleomycin,中文名腐草霉素,由Streptomyces verticillus(輪枝鏈霉菌)的突變株產(chǎn)生的一種糖肽抗生素,屬于博來霉素(bleomycin)家族。抑菌機制在于腐草霉素可結(jié)合并插入DNA,從而破壞其雙螺旋結(jié)構(gòu)的完整性。腐草霉素對大多數(shù)細菌、真菌、酵母、植物細胞和哺乳動物細胞都有活性,尤其適用于對ZeocinTM敏感性低的細胞,如酵母菌和絲狀真菌。
腐草霉素是分子遺傳學研究中的選擇性抗生素之一,可用于篩選攜帶Sh ble基因的轉(zhuǎn)染細胞。Sh ble基因來源于Streptoalloteichus hindustanus,其可編碼一種14kDa的蛋白,該蛋白可與腐草霉素強烈結(jié)合從而抑制其切割DNA鏈的活性。腐草霉素是由多種結(jié)構(gòu)類似物構(gòu)成的復合物,這些復合物僅僅在末端胺基有所差異。另外,因?qū)儆阢~離子螯合的復合物,溶液呈藍色。
本品以20mg/ml的無菌溶液形式提供,可直接用于細胞培養(yǎng),在0.1-50μg/ml濃度范圍內(nèi),腐草霉素可以抑制大多數(shù)好氧細胞的生長。
產(chǎn)品性質(zhì)
CAS號(CAS NO.) | 11006-33-0 |
分子式(Formula) | C55H85O21N20S2Cu?HCl |
分子量(Molecular weight) | 1525 |
純度(Purity) | >90%(HLPC) |
結(jié)構(gòu)式(Structure) |
運輸與保存方法
冰袋運輸。
4°C或-20°C保存。4°C穩(wěn)定保存12個月,-20°C可穩(wěn)定保存18個月。避免反復凍融。
操作方法
【注1】細胞對腐草霉素的敏感性受pH值影響,如pH值越高,敏感性越高;另外,對于高滲透壓培養(yǎng)基如原生質(zhì)體再生用的培養(yǎng)基,腐草霉素的活性會明顯降低2-3倍。因此也可能通過使用低鹽培養(yǎng)基來降低腐草霉素使用量。
【注2】使用前需將低溫存放的腐草霉素置于室溫回溫,之后低速充分混勻。
1大腸桿菌
攜帶bleomycin抗性基因如Sh ble,Tn5的質(zhì)粒,一旦轉(zhuǎn)化進入大腸桿菌受體菌如HB101, DH5a, MC1061,賦予其腐草霉素抗性。
腐草霉素抗性的轉(zhuǎn)化子可以在添加5 μg/ml Phleomycin的低鹽LB瓊脂培養(yǎng)基(Yeast extract 5g/L, Tryptone 10g/L, NaCl 5g/L, Agar 15 g/L, pH 7.5)中進行篩選。加有腐草霉素的平板可于4℃穩(wěn)定保存1個月。
2酵母菌
釀酒酵母的腐草霉素抗性轉(zhuǎn)化子可在添加10 μg/ml Phleomycin的YEPD培養(yǎng)基中進行篩選。
操作步驟:按常規(guī)方法進行酵母細胞轉(zhuǎn)化,一旦DNA進入細胞后,用YEPD培養(yǎng)基稀釋細胞并置于搖床上培養(yǎng)6h或24H,使其抗性性狀得以表達。之后將細胞冰浴1h并涂布培養(yǎng)在添加10 μg/ml Phleomycin的YEPD(pH 7.0)固體培養(yǎng)基上。
3真菌
根據(jù)轉(zhuǎn)化子對Phleomycin 的敏感性不同,在添加有10-50 μg/ml腐草霉素的再生培養(yǎng)基內(nèi)進行篩選。先將細胞在4℃孵育24H然后置于生長溫度培養(yǎng),可提高其對抗生素的敏感性。
4 植物細胞
根據(jù)植物類型不同,選擇5-25 μg/ml Phleomycin進行轉(zhuǎn)化子篩選。
5 哺乳動物細胞
5-50 μg/ml Phleomycin,推薦先通過建立滅殺曲線來確定*濃度。與G418做比較,可能需要更長的時間來殺死細胞或者使細胞從平板上脫落,尤其當細胞處于高密度的情況。
依細胞系不同,通常需要5~21天來挑選具腐草霉素抗性的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞。
注意事項
1)腐草霉素對濃酸較為敏感,但可短時間暴露于稀酸中。使用前將本品回溫至室溫,并輕輕混勻。
2)腐草霉素有毒,避免直接接觸皮膚,不可吞服。酸性或堿性pH,或次磷酸鈉中會即刻失效。
3)為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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