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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 |
|---|
產品介紹
CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit
細胞增殖與示蹤檢測試劑盒
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） |
CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit 細胞增殖與示蹤檢測試劑盒 | 40714ES76 | 500 T | -20℃避光干燥保存 | 398.00 |
40714ES80 | 1000 T | -20℃避光干燥保存 | 728.00 |
產品描述
是基于CFDA, SE對細胞進行示蹤及增殖檢測的試劑盒，由CFDA,SE粉末、溶劑及相關細胞染色緩沖液組成，該試劑盒主要工作原理為：CFDA, SE具有細胞膜滲透性，本身不具有熒光發光性。當通過被動運輸穿透細胞膜進入活細胞后，可被胞漿內的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺酯（carboxyfluorescein succinimidyl ester, CFSE），后者可發強烈的綠色熒光，不能穿透細胞膜，能完好的保留在胞內。CFSE還可自發性并不可逆地與細胞內的氨基結合從而偶聯到細胞蛋白質上，同時過量且未被偶聯的CFDA, SE通過被動擴散回到細胞外培養基內，被后續清洗步驟所清除。經CFDA, SE標記的非分裂細胞的熒光非常穩定，穩定標記的時間可達數月，因此非常適用于細胞群落分析。
CFDA, SE標記細胞的熒光非常均一，優于以前使用的其他細胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也更均一。在細胞分裂增殖過程中，CFSE 標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變為親代細胞的一半，通過流式細胞儀（FL1通道）根據熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次（1/2的熒光強度），二次（1/4的熒光強度），三次（1/8的熒光強度），以及更多分裂次數的細胞。CFSA，SE可檢測分裂次數多達八次甚至更多。經CFDA, SE標記的細胞可用于體外和體內增殖研究，且具有不會使鄰近細胞染色的功能。CFDA, SEzui常用于淋巴細胞的增殖檢測，也可用于成纖維細胞，自然殺傷細胞，造血祖細胞等其他細胞的增殖檢測。
CFDA, SE標記細胞呈綠色熒光，Ex=494 nm，Em=521 nm，除了流式細胞儀檢測細胞增殖外，還可用熒光酶標板定量活細胞數目，或者用熒光顯微鏡進行均一染色的細胞示蹤觀察。
本品為CFDA，SE細胞增殖與示蹤檢測試劑盒，包含配制CFDA，SE儲存液所需的溶劑和細胞標記用的染色緩沖液，簡化了實驗前期準備工作。另，CFDA,SE標記細胞一般15 min即可完成，對于不同細胞，需要自行摸索*標記時間。按照每個樣本的標記體積為2 mL計算。對應貨號40714ES76和40714ES80的試劑盒可分別進行500次和1000次檢測。
產品組分
組分編號 | 組分名稱 | 產品編號/規格 | |
40714ES76（500 T） | 40714ES80（1000 T） | ||
40714-A | CFDA,SE 熒光探針 | 1管×2 | 1管×4 |
40714-B | CFDA,SE 溶劑 | 500 µL×2 | 500 µL×4 |
40714-C | 細胞染色緩沖液（5×） | 200 mL×1 | 200 mL×2 |
運輸與保存
冰袋運輸。-20℃干燥避光保存，有效期1年。
注意事項
- CFDA,SE易被水解，在水溶液中會很快變質。因此保存過程中粉末或者儲存液都需干燥保存；而且使用過程中避免接觸水。但在標記細胞的過程中和水接觸是在許可范圍內的。
- CFDA,SE溶劑在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內，于20-25℃水浴溫育片刻至全部溶解后方可使用。
- 不同的細胞其細胞內酯酶活性不同，因此染色效果具有差異性。
- 雖然本試劑盒已對CFDA,SE染色體系做了優化處理，但建議使用者根據自身的細胞類型，培養條件以及應用的不同來梯度摸索*的工作濃度，以zui低濃度得到適宜的標記效率為準。
- 熒光染料均存在淬滅問題，染色過程需盡量避光。
- 為了您的健康，實驗操作時請穿實驗服和帶一次性手套。
操作方法
- CFDA,SE儲存液（1000×）的配制
加入500 µL CFDA,SE溶劑到1管CFDA,SE熒光探針中進行溶解，充分混勻即得到1000×的儲存液。
- 該儲存液在1個月內使用完畢，zui長不超過2個月。剩余儲存液請務必分裝后于≤-20℃避光干燥保存，避免反復凍融，-70℃避光保存可適當延長保存周期。
- 2×CFDA,SE工作液的配制
取適當體積的細胞染色緩沖液（5×），用無菌的去離子水進行5倍稀釋，配制成1×細胞染色緩沖液，并利用該緩沖液對上述CFDA,SE（1000×）儲存液進行500×稀釋，如取2 μL CFSE儲存液加入到1 mL 1×細胞染色緩沖液中，混勻后即可得到2×CFDA,SE染色工作液?！?strong>注意】：雖然本試劑盒已對CFDA,SE染色體系做了優化處理，但建議使用者根據自身的細胞類型，培養條件以及應用的不同來梯度摸索*的工作濃度，以zui低工作濃度得到適宜的標記效率為準。
- 操作步驟
- 離心收集細胞，利用1 mL 1×細胞染色緩沖液懸浮細胞于15 mL離心管，并調整細胞濃度為1-5×106個/mL；
- 把1 mL CFDA,SE工作液(2×)加入到上述15 mL離心管內，輕輕混勻。
- 37℃孵育10 min?！?strong>注意】：對于不同細胞，需要自行摸索*標記時間。
- 立即在15 mL離心管內加入約10 mL*細胞培養液(含10% FBS)，室溫顛倒數下混勻，以終止標記反應。
- 室溫離心去上清，再用5-10 mL*細胞培養液洗滌一次。
- 再加入5-10 mL*細胞培養液，37℃孵育10 min，以促進CFSE【酯酶催化CFDA,SE得到的熒光產物】在細胞內的駐留及未反應的CFDA,SE進入*細胞培養液。離心去上清，完成zui后一次洗滌。
- 此時標記好的細胞已可進行后續的體外增殖檢測或者特定目的的細胞示蹤。按照正常方法培養細胞，然后在合適的時間點用熒光顯微鏡或流式細胞儀【FL1通道】進行結果分析，呈綠色熒光。標記的細胞也可用于活體動物的移植，并用熒光進行示蹤。
【注意】：若需要對細胞進行固定，請用醛類固定劑如3.7%多聚甲醛于室溫固定15 min；之后若還需要進行其他如抗體標記，請用冰丙酮透化處理細胞10 min。
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產品編號 | 產品名稱 | 規格 | 價格（元） |
40714ES76 | 細胞增殖與示蹤檢測試劑盒 | 500 T | 398.00 |
40714ES80 | 細胞增殖與示蹤檢測試劑盒 | 1000 T | 728.00 |
40715ES25 | CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針 | 25 mg | 1599.00 |
40717ES25 | CDCFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針 | 25 mg | 1900.00 |
40718ES50 | CM-DiI 活細胞染色劑 | 50 μg | 359.00 |
40719ES50 | Calcein, AM, Ultrapure Grade 鈣黃綠素，超純級 | 1×50 μg | 199.00 |
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