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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 貨號 | 40601ES10 |
|---|---|---|---|
| 應用領域 | 醫療衛生,生物產業 |
產品介紹
GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit
GMyc-PCR支原體檢測試劑盒
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元） | *（元） |
GMyc-PCR Mycoplasma Test Kit GMyc-PCR支原體檢測試劑盒 | 40601ES10 | 10 assays | -20℃ | 1120.00 | 327.00 |
40601ES20 | 20 assays | -20℃ | 1764.00 | 557.00 |
產品描述
細胞培養是生命科學研究中常用的實驗手段。不像其它常用的實驗方法，細胞培養是一個動態的連續過程，細胞通常會對操作失誤或污染物有所反應，這些反應往往表現出不正常的細胞狀態或培養基外觀。如果受到支原體污染時，細胞形態較之無明顯變化，極易被忽視，往往直到污染非常嚴重時才能發現。受污染的細胞膜上可能有幾百個支原體，這些支原體競爭營養并釋放有毒的代謝產物，嚴重影響實驗結果。
研究表明，至少二十多種支原體能污染細胞，其中zui常見的有：口腔支原體（M.orale）、精氨酸支原體（M.arginini）、豬鼻支原體（M.hyorhinis）、發酵支原體（M. fermentans）、人型支原體（M. hominis）、唾液支原體（M.salivarium）、肺支原體（M.pulmonis）和梨支原體（M.pirum）等。培養細胞的支原體污染率在4%-92%不等，其污染來源包括工作環境、操作者本身（一些支原體是人體的正常菌群）、培養基、血清、細胞交叉污染、實驗器材和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。
確認細胞培養過程中出現問題的潛在原因是一項困難且耗時的任務，在細胞培養中，任何突然的變化都應該被懷疑，同時良好的試驗規范和定期檢測支原體污染也十分必要。支原體檢測的方法有很多種，如直接培養、DNA熒光染色、ELISA和PCR法等。
GMyc-PCR支原體檢測試劑盒主要采用PCR方法對各種生物材料（如細胞培養物、實驗動物分泌物、動物血清等）支原體感染的檢測。它綜合了幾個優勢：靈敏、特異、快速并且可以用直接用細胞培養上清液檢測。本制品通過PCR方法檢測培養細胞等生物材料中的支原體，所用引物為根據支原體16S-23S rRNA序列保守區域設計，只特異性擴增支原體DNA，檢出靈敏度與特異性均較高。PCR擴增及電泳分析只需數個小時，操作方便簡單。
產品組分
編號 | 組分 | 產品編號/規格 | |
40601ES10 | 40601ES20 | ||
40601-A | GMyc-1st PCR Mix | 250µl | 2×250µl |
40601-B | GMyc-2nd PCR Mix | 250µl | 2×250µl |
40601-C | Positive Control Template注1，2 | 20µl | 20µl |
【注1】：長期不用時，可-80℃冷凍保存。
【注2】：PCR反應極其靈敏，為防止假陽性，加樣時，zui后加陽性對照。
運輸與保存方法
冰袋運輸。-20℃保存。
實驗流程
此PCR反應為巢式PCR，*輪PCR結束后，取其反應產物為第二輪PCR模板。根據兩輪PCR產物電泳條帶之有無及片
段大小來分析結果。貼壁細胞培養3-6天后，直接取其上清液進行PCR反應。為排除細胞培養基抑制PCR反應，陽性對照中需加入等量的細胞上清液。懸浮細胞不能作為樣品直接檢測，會干擾PCR反應，需提取DNA并進行PCR。
*輪PCR：
1. 充分融解GMyc-1st PCR Mix，按下列表格配制反應液：
試劑 | 實驗組 | 陽性對照 | 陰性對照 |
GMyc-1st PCR Mix | 25µl | 25µl | 25µl |
樣品 | 4µl | 4µl | |
ddH2O | 21µl | 20µl | 25µl |
Positive Control Template注1 | 1µl |
【注】：為防止Positive Control Template污染，請將實驗組和陰性對照組加完以后，zui后再將Positive Control Template加入陽性對照組。
2. 按下列條件進行PCR反應：
94℃ 5 min
94℃ 30 s
58℃ 1 min 30~35 cycles
72℃ 1 min
72℃ 7 min
第二輪PCR：
1. 充分融解PCR Mix，按下列表格配制反應液：
試劑 | 實驗組 | 陽性對照 | 陰性對照 |
GMyc-2nd PCR Mix | 25µl | 25µl | 25µl |
ddH2O | 24µl | 24µl | 24µl |
1st PCR反應液1st PCR反應液（1000倍稀釋液）* | 1µl | 1µl | 1µl |
【注】*: *輪PCR反應液需經1000倍稀釋后方可用于第二輪PCR模板。
2. 按下列條件進行PCR反應：
94℃ 5 min
94℃ 30 s
58℃ 1 min 30~35 cycles
72℃ 1 min
72℃ 7 min
反應結束后，取10 μl 的PCR反應液（不需要加loading buffer）直接進行1.5%瓊脂糖凝膠電泳，確認PCR擴增產物。
推薦使用頻率
新細胞進入實驗室 | 必檢 |
液氮保存前 | 必檢 |
定期常規 | 每月檢測一次 |
發現污染后 | 每周檢測一次 |
發現細胞異常 | 隨時檢測 |
注意事項
1）使用本試劑前請仔細閱讀本說明書全文。
2）操作時應盡量少說話，因口腔中也含有支原體，可能引起樣品污染，而造成假陽性；整個檢測過程中，反應體系的配制、樣本處理及加樣、PCR擴增應分區域進行，以避免交叉污染。
3）實驗時，試劑盒組分中的試劑使用前應充分融化并混勻（混勻時禁止激烈振蕩，只需要進行上下倒置多次進行混勻）。
4）反應管中加好所有的試劑后，應盡快上PCR儀進行擴增，以免形成過多的二聚體。
5）細胞培養物中含有青霉素和鏈霉素等抗生物素不會影響本品的檢測結果。如果用戶需要進一步提高檢測靈敏度，建議細胞在不含青霉素和鏈霉鏈等抗生素中進行培養2-3天后送樣檢測。
6）為了您的健康，實驗操作時請穿實驗服和帶一次性手套。
附錄
各種支原體擴增片段大小
Species | *輪PCR | 第二輪PCR |
M. hyopneumoniae | 681 | 237 |
M. neurolyticum | 501 | 196 |
M. fermentans | 491 | 195 |
M. pulmonis | 477 | 189 |
M. hyorhinis | 448 | 211 |
M. orale | 423 | 179 |
M. capricolum | 415 | 179 |
M. arthritidis | 408 | 157 |
M. salivarium | 403 | 151 |
M. hominis | 370,369 | 147,148 |
M. arginini | 369 | 145 |
U. urealyticum | 482,481 | 154 |
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