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支原體污染檢測試劑盒（PCR法）說明-上海哈靈
閱讀：1137 發(fā)布時間：2013-8-10上海哈靈支原體污染檢測試劑盒（PCR法）-上海哈靈
（PCR Mycoplasma Detection Kit）
Cat number：YS012
Store at -20℃ for one year
Expire date：
For Research Use Only
（PCR Mycoplasma Detection Kit）
Cat number：YS012
Store at -20℃ for one year
Expire date：
For Research Use Only
一、 上海哈靈支原體污染檢測試劑盒說明：
本試劑盒經過PCR法對細胞培育物、動物分泌物等多種生物資料進行支原體污染檢測。常規(guī)培養(yǎng)法進行支原體檢測通常需求幾天的時間，而本試劑盒經過PCR擴增及電泳分析進行支原體檢測只需要幾個小時，既方便又快捷。本試劑盒的多對引物能特異性擴增多種支原體rRNA基因片段，一次就能夠檢測至少11種的支原體，包含M. fermentans，M. hyorhinis，M. arginini，M. orale，M. salivarium，M. hominis，M. pulmonis，M. arthritidis, M. neurolyticum, M. hyponeumoniae, M. capricolum 等。其原理是原核生物的rRNA堿基序列十分保守，而rRNA操縱子上編碼rRNA的DNA間隔區(qū)如16S和23S間隔區(qū)，各種生物種間的堿基序列不一樣很大。這個間隔區(qū)的DNA序列及長度在支原體各個種間既有相對保守的部分，也有具有很大區(qū)別的部分。因而能夠在編碼16S和23S rRNA的DNA上設計一對引物，擴增編碼16S和23S rRNA的DNA間隔區(qū)，然后在編碼16S和23S rRNA的DNA間隔區(qū)的保守區(qū)上設計一條引物，在編碼23S rRNA的DNA上設計一條引物進行嵌套式PCR。能特異性檢測出支原體DNA，檢測靈敏度與特異性都很高。
本試劑盒經過PCR法對細胞培育物、動物分泌物等多種生物資料進行支原體污染檢測。常規(guī)培養(yǎng)法進行支原體檢測通常需求幾天的時間，而本試劑盒經過PCR擴增及電泳分析進行支原體檢測只需要幾個小時，既方便又快捷。本試劑盒的多對引物能特異性擴增多種支原體rRNA基因片段，一次就能夠檢測至少11種的支原體，包含M. fermentans，M. hyorhinis，M. arginini，M. orale，M. salivarium，M. hominis，M. pulmonis，M. arthritidis, M. neurolyticum, M. hyponeumoniae, M. capricolum 等。其原理是原核生物的rRNA堿基序列十分保守，而rRNA操縱子上編碼rRNA的DNA間隔區(qū)如16S和23S間隔區(qū)，各種生物種間的堿基序列不一樣很大。這個間隔區(qū)的DNA序列及長度在支原體各個種間既有相對保守的部分，也有具有很大區(qū)別的部分。因而能夠在編碼16S和23S rRNA的DNA上設計一對引物，擴增編碼16S和23S rRNA的DNA間隔區(qū)，然后在編碼16S和23S rRNA的DNA間隔區(qū)的保守區(qū)上設計一條引物，在編碼23S rRNA的DNA上設計一條引物進行嵌套式PCR。能特異性檢測出支原體DNA，檢測靈敏度與特異性都很高。
二、上海哈靈支原體污染檢測試劑盒組份：
組份 012（20 assays） 貯存條件 10×Taq Buffer（不含Mg2＋） 1.0 mL -20℃ MgCl2（25mM） 1.0 mL -20℃ Taq DNA Polymerase（5 U /μl） 100 U -20℃ Myc F1 Primer （10μM） 50μL -20℃ Myc R1 Primer（10μM） 50μL -20℃ Myc F2 Primer（10μM） 50μL -20℃ Myc R2 Primer（10μM） 50μL -20℃ Control Template（1 ng/μl） 50μL -20℃ DNA溶解液 2 mL -20℃ ddH2O 5 mL -20℃
組份 012（20 assays） 貯存條件 10×Taq Buffer（不含Mg2＋） 1.0 mL -20℃ MgCl2（25mM） 1.0 mL -20℃ Taq DNA Polymerase（5 U /μl） 100 U -20℃ Myc F1 Primer （10μM） 50μL -20℃ Myc R1 Primer（10μM） 50μL -20℃ Myc F2 Primer（10μM） 50μL -20℃ Myc R2 Primer（10μM） 50μL -20℃ Control Template（1 ng/μl） 50μL -20℃ DNA溶解液 2 mL -20℃ ddH2O 5 mL -20℃
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
電泳儀、離心機、PCR儀、凝膠成像儀、微量移液器、dNTPs（10mM）、瓊脂糖、溴化乙錠等
四、運用注意事項
整個試驗，必須標準操作，反應系統(tǒng)的配置、樣本處置及加樣、PCR擴增應分區(qū)域進行，以避免交叉污染。
電泳儀、離心機、PCR儀、凝膠成像儀、微量移液器、dNTPs（10mM）、瓊脂糖、溴化乙錠等
四、運用注意事項
整個試驗，必須標準操作，反應系統(tǒng)的配置、樣本處置及加樣、PCR擴增應分區(qū)域進行，以避免交叉污染。
上海哈靈支原體污染檢測試劑盒操作方法：
1.收取待檢樣品（細胞通常成長至80％左右即可，貼壁細胞不宜用消化液消化細胞，可以運用細胞刮刮取細胞），然后取細胞懸液200ul（約1～3×105細胞數）至離心管，12000rpm離心5～10min；去除上清，加入50ul DNA溶解液，充分懸浮沉淀物，沸水浴5min；樣品運用前12000rpm離心5～10min，取上清4ul作為PCR反應模板；剩下樣品能夠-20℃保藏。樣本有時也能夠直接用污染液直接做PCR反應。
上海哈靈支原體污染檢測試劑盒PCR反應：
*步PCR：
50μL系統(tǒng)PCR反應（如客戶需求運用更小量的反應系統(tǒng)，試劑加樣量按份額進行削減）：
（1）．使用前每個組份輕輕混勻，然后2000rpm離心20s；
（2）．取滅過菌的0.2mL離心管，在冰上順次參加
1.收取待檢樣品（細胞通常成長至80％左右即可，貼壁細胞不宜用消化液消化細胞，可以運用細胞刮刮取細胞），然后取細胞懸液200ul（約1～3×105細胞數）至離心管，12000rpm離心5～10min；去除上清，加入50ul DNA溶解液，充分懸浮沉淀物，沸水浴5min；樣品運用前12000rpm離心5～10min，取上清4ul作為PCR反應模板；剩下樣品能夠-20℃保藏。樣本有時也能夠直接用污染液直接做PCR反應。
上海哈靈支原體污染檢測試劑盒PCR反應：
*步PCR：
50μL系統(tǒng)PCR反應（如客戶需求運用更小量的反應系統(tǒng)，試劑加樣量按份額進行削減）：
（1）．使用前每個組份輕輕混勻，然后2000rpm離心20s；
（2）．取滅過菌的0.2mL離心管，在冰上順次參加
10×Taq Buffer 5 μL
dNTPs （10mM） 1 μL
MgCl2 （25mM） 4 μL
Myc F1 （10μM） 1 μL
Myc R1 （10μM） 1 μL
DNA樣品 1~5 μL
Taq DNA Polymerase 0.5 μL
ddH2O up to 50 μL
（3）．輕輕混勻，2000rpm離心20s；
（4）．進行PCR擴增
PCR擴增條件：
94°C，5min；
94°C，30 sec；55°C，2min；72°C，1 min；32 Cycles；
72°C，10 min，
dNTPs （10mM） 1 μL
MgCl2 （25mM） 4 μL
Myc F1 （10μM） 1 μL
Myc R1 （10μM） 1 μL
DNA樣品 1~5 μL
Taq DNA Polymerase 0.5 μL
ddH2O up to 50 μL
（3）．輕輕混勻，2000rpm離心20s；
（4）．進行PCR擴增
PCR擴增條件：
94°C，5min；
94°C，30 sec；55°C，2min；72°C，1 min；32 Cycles；
72°C，10 min，
第二步PCR：
50μL系統(tǒng)PCR反應（如客戶需求運用更小量的反應系統(tǒng)，試劑加樣量按份額進行削減）：
（1）．使用前每個組份輕輕混勻，然后2000rpm離心20s；
（2）．取滅過菌的0.2mL離心管，在冰上順次加入
50μL系統(tǒng)PCR反應（如客戶需求運用更小量的反應系統(tǒng)，試劑加樣量按份額進行削減）：
（1）．使用前每個組份輕輕混勻，然后2000rpm離心20s；
（2）．取滅過菌的0.2mL離心管，在冰上順次加入
10×Taq Buffer 5 μL
dNTPs （10mM） 1 μL
MgCl2 （25mM） 4 μL
Myc F2 （10μM） 1 μL
Myc R2 （10μM） 1 μL
*步產品 1~5 μL
Taq DNA Polymerase 0.5 μL
ddH2O up to 50 μL
（3）．輕輕混勻，2000rpm離心20s；
（4）．進行PCR擴增
PCR擴增條件：
94°C，5min；
94°C，30 sec；55°C，2min；72°C，1 min；32 Cycles；
72°C，10 min，
3.反應完畢后，取反應液10μL進行瓊脂糖凝膠電泳，承認PCR反應產品。若是此PCR產品需用于今后試驗，應將PCR產品冷凍保管。
4.依據感染支原體類型的不一樣，擴增產品大小有所不一樣，*步PCR產品在350～700bp 之間，第二步PCR產品在150～250bp之間。
線粒體膜電位檢測試劑盒（JC-1）
TRAP-PCR端粒酶活性檢測試劑盒
dNTPs （10mM） 1 μL
MgCl2 （25mM） 4 μL
Myc F2 （10μM） 1 μL
Myc R2 （10μM） 1 μL
*步產品 1~5 μL
Taq DNA Polymerase 0.5 μL
ddH2O up to 50 μL
（3）．輕輕混勻，2000rpm離心20s；
（4）．進行PCR擴增
PCR擴增條件：
94°C，5min；
94°C，30 sec；55°C，2min；72°C，1 min；32 Cycles；
72°C，10 min，
3.反應完畢后，取反應液10μL進行瓊脂糖凝膠電泳，承認PCR反應產品。若是此PCR產品需用于今后試驗，應將PCR產品冷凍保管。
4.依據感染支原體類型的不一樣，擴增產品大小有所不一樣，*步PCR產品在350～700bp 之間，第二步PCR產品在150～250bp之間。
線粒體膜電位檢測試劑盒（JC-1）
TRAP-PCR端粒酶活性檢測試劑盒
以上信息為上海哈靈支原體污染檢測試劑盒的詳細內容！