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PCR檢測試劑盒反應體系

 

  SYBR Green I 是一種于小溝中的雙鏈 DNA 染料。與雙鏈 DNA 后，其熒光大大增強。這一性質使其用于擴增產品的檢測十分理想。 SYBR Green I 的大吸收波長約為 497nm ，發射波長大約為 520nm。在 PCR反應系統中，參加過量 SYBR 熒光染料， SYBR 熒光染料特異性地摻入 DNA 雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的 SYBR 染料分子不會發射任何熒光信號，然后確保熒光信號的添加與 PCR 產品的添加*同步。

 

  SYBR Green I 在核酸的實時檢測方面有許多優點，因為它與一切的雙鏈 DNA 相，不用因為模板不一樣而格外定制，因而設計的程序通用性好，且價格相對較低。使用熒光染料能夠指示雙鏈 DNA 熔點的性質，通過熔點曲線分析能夠辨認擴增產品和引物二聚體，因而能夠區別非特異擴增，進一步地還能夠完成單色多重測定。此外，因為一個 PCR 產品能夠與多分子的染料，因而 SYBR Green I 的靈敏度很高。可是，因為 SYBR Green I 與一切的雙鏈 DNA 相結合，因而由引物二聚體、單鏈二級布局以及過錯的擴增產品導致的假陽性會影響定量的性產生偏差。經過測量升高溫度后熒光的改變能夠協助下降非特異產品的影響 。由解鏈曲線來剖析產品的均一性有助于剖析由 SYBR Green I 得到定量成果。

 

 

PCR檢測試劑盒反應體系 2

 

  LUX （light upon extention） 引物是利用熒光符號的引物完成定量的一項新技術。目標特異的引物對中的一個引物 3’ 端用熒光報告基團標記。在沒有單鏈模板的情況下，該引物本身匹配，構成發夾結構，使熒光淬滅。在沒有目標片斷的時候，引物與模板匹配，發夾結構打開，產生特異的熒光信號。