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PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑盒產(chǎn)品說明書 主要用途 PicoGreen雙鏈DNA熒光定量測定試劑是一種旨在通過使用PicoGreen熒光染料與樣品中雙鏈DNA的高度特異性結(jié)合而產(chǎn)生熒光信號來定量樣品中DNA含量的而經(jīng)典的技術方法。該技術經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種原核生物和真核生物的細胞或組織DNA以及環(huán)境中DNA含量分析。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，高度敏感。 技術背景 作為DNA染色劑之一的PicoGreen熒光染料特異性地與樣品中雙鏈DNA結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號。PicoGreen技術可以檢測到低達0.5納克雙鏈DNA的變化。DNA的微量增加引起熒光信號強度（Intensity）或相對熒光單位（RFU）的顯著增加。其自發(fā)熒光（Autofluorescence）忽略不計，重復性標準差異（Standard Deviation）低，不受樣品化學成分的干擾。 產(chǎn)品內(nèi)容 染色液（Reagent A） 62.5微升 稀釋液（Reagent B） 15 毫升 標準液（Reagent C） 1毫升 產(chǎn)品說明書 1份 保存方式 保存染色液（Reagent A）和標準液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，染色液（Reagent A）避免光照，有效保證6月 用戶自備 1.5毫升離心管：用于工作液配制的容器 比色皿或96孔板：用于熒光分析的容器 熒光分光光度儀或熒光酶標儀：用于熒光定量分析 實驗步驟 一、測定準備 1．準備好待測樣品，置于冰槽里 2．設定好熒光分光光度儀（溫度為37℃）：激發(fā)波長480nm，散發(fā)波長530nm，并置零 3．實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出5毫升稀釋液（Reagent B）到新的15毫升離心管，加入25微升染色液（Reagent A），混勻后，用錫紙包裹，標記為染色工作液，放在暗室里。然后進行下列操作。 二、構(gòu)建標準曲線 1．準備好5個1.5毫升離心管，標記為1至5號管 2．分別加入500微升稀釋液（Reagent B）到每個離心管 3．移取500微升標準液（Reagent C）到1號管，混勻 4．小心移取500微升1號管稀釋的標準液（Reagent C）到2號管，混勻 5．小心移取500微升2號管稀釋的標準液（Reagent C）到3號管，混勻 6．小心移取500微升3號管稀釋的標準液（Reagent C）到4號管，混勻 7．將1至5號管放進冰槽里備用；標準管含量見下表 管號 緩沖液（Reagent B） 標準液（Reagent C） 標準DNA總量 1 500微升 500微升 1微克 2 500微升 500微升1號管 0.5微克 3 500微升 500微升2號管 0.25微克 4 500微升 500微升3號管 0.125微克 5 500微升 空對照 0 8．移取500微升含有染色液（Reagent A）和稀釋液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿 9．加入500微升上述配制的標準液 10．室溫下，孵育5分鐘，避免光照 11．即刻放進熒光分光光度儀測讀：獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU） 12．重復實驗步驟8至11四次 13．繪制標準曲線：縱座標（Y軸）為相對熒光單位（RLU）；橫坐標（X軸）為DNA含量（微克） 三、樣品檢測 1．移取500微升含有染色液（Reagent A）和稀釋液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿 2．加入500微升待測樣品 3．室溫下，孵育5分鐘，避免光照 4．即刻放進熒光分光光度儀測讀：獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU） 5．根據(jù)標準曲線獲得樣品對應DNA含量（微克） 6．樣品實際DNA濃度： [根據(jù)標準曲線獲得樣品對應DNA含量（微克）X樣品稀釋倍數(shù)]0.5（樣品容量；毫升）=微克/毫升 注意事項 1．本產(chǎn)品為20次（比色皿）和100次（96孔板）操作，包括標準曲線測定 2．操作時，須戴手套 3．使用新鮮配制的染色工作液，務必不要超過2小時，且注意避光 4．建議使用塑料管配制染色工作液，而不是玻璃制品 5．孵育時，避免光照 6．系統(tǒng)檢測，標準曲線測定1次即可；如果儀器更換，則需要重新測定1次 7．如果熒光讀數(shù)過高，可以相應稀釋樣品量 8．可以使用熒光酶標儀檢測，試劑用量和體系均除以5，包括標準DNA含量，其計算公式： [根據(jù)標準曲線獲得樣品對應DNA濃度（微克）X樣品稀釋倍數(shù)]÷0.1（樣品容量；毫升）＝微克/毫升 9．鹽類、尿素、乙醇、lv仿、去垢劑、蛋白、瓊脂糖、單鏈DNA和RNA不會干擾檢測 10．本公司提供系列DNA檢測試劑產(chǎn)品 質(zhì)量標準 1．本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定高度敏感