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尼羅紅熒光染色試劑盒使用說明書
閱讀：6626 發布時間：2021-3-11
主要用途
尼羅紅熒光染色溶液是一種旨在通過與脂類物質的結合并發出熒光檢測信號，快速、敏感、可靠
地活體定量測定細胞內脂類成分的常用熒光染料。適用于各種細胞包括細菌細胞，也用于蛋白質電泳染色。
產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，著色清晰靈敏。
技術背景
尼羅紅染色劑（9-diethylamino-5H-benzo[alpha]-phenoxazine-5-one；Nile red）是一種親脂性的惡嗪類熒光染
料。與脂類物質包括臘酯（wax ester）和三酰甘油（triacylglycerol）以及各種脂肪酸結合后，在激發波長
543nm 的激發下，顯示強烈桔紅色熒光（散發波長 598nm）。同時在紫外光的照射下顯示紅色。
產品內容
染色液（Reagent A） （0.5 毫克/毫升） 毫升
產品說明書 1 份
保存方式
保存 染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里，避免光照，有效保證 6 月
用戶自備
HANK 平衡鹽緩沖溶液（ ）或 PBS 緩沖溶液（ ）：用于清理細胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（ ）：用于細胞脫離
*細胞培養液（ ）：用于細胞處理所需的培養基
15 毫升錐形離心管：用于細胞收集的存放
微型臺式離心機：用于細胞沉淀收集
臺式離心機：用于細胞沉淀收集
1.5 毫升離心管：用于細胞檢測操作的容器
2 毫升離心管：用于染色工作液配制的容器
37℃培養箱：用于孵育反應物
比色皿：用于熒光定量分析
熒光顯微鏡：用于觀察熒光細胞
熒光分光光度儀：用于定量檢測熒光細胞和脂類產量
實驗提示
方法一、間接法
實驗開始前，將試劑盒里的 染色液（Reagent A）凍融，置入冰槽里。然后進行下列操作。
1． 開啟熒光顯微鏡或熒光分光光度儀
2． 小心抽掉 25cm2
細胞培養瓶里的培養液
3． 加入 3 毫升用戶自備的 HANK 平衡鹽緩沖溶液或 PBS 緩沖溶液到細胞培養瓶，覆蓋培養瓶表面
4． 小心抽掉清洗液
5． 加入 1 毫升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個培養平面
6． 置入 37℃培養箱 1 分種
7． 振動培養瓶，使細胞脫落
8． 加入 5 毫升用戶自備的*細胞培養液
9． 移入 15 毫升錐形離心管
10．放進臺式離心機離心 10 分鐘，速度為 300g
11．小心抽去上清液
12．加入 xx 毫升用戶自備的 HANK 平衡鹽緩沖溶液或 PBS 緩沖溶液，充分混勻
13．移入到新的 1.5 毫升離心管
14．加入 xx 微升 染色液（Reagent A）到離心管
15．用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
16．在 37℃培養箱孵育 10 分鐘，避免光照
17．放進微型臺式離心機離心 30 秒，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
18．小心抽去上清液
19．加入 1 毫升用戶自備的 HANK 平衡鹽緩沖溶液或 PBS 緩沖溶液，充分混勻
20．（選擇步驟）放進微型臺式離心機離心 30 秒，速度為 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）
21．（選擇步驟）小心抽去上清液
22．（選擇步驟）加入 1 毫升用戶自備的 HANK 平衡鹽緩沖溶液或 PBS 緩沖溶液，充分混勻
23．檢測方法
A） 熒光顯微鏡定性分析
1） 移出 10 微升離心管中的混勻物到載玻片上
2） 放上蓋玻片或封片
3） 在熒光顯微鏡下觀察熒光細胞：激發波長 543nm，散發波長 598nm――顯示強烈桔紅色熒
光細胞的為脂類豐富的陽性細胞
B） 熒光分光光度計定量分析
1） 移取 1 毫升細胞懸液到 1 毫升比色皿
2） 放進熒光分光光度計測讀：激發波長 543nm，散發波長 598nm――確定活體細胞脂類產量
方法二：直接法
實驗開始前，將試劑盒里的 染色液（Reagent A）凍融，然后移出 2 毫升用戶自備的 HANK 平
衡鹽緩沖溶液或 PBS 緩沖溶液到 2 毫升離心管，加入 2 微升 染色液（Reagent A），混勻后，置
入冰槽里，標記為 染色工作液。然后進行下列操作。
1． 開啟熒光顯微鏡
2． 小心抽掉 25cm2
細胞培養瓶里的培養液
3． 加入 3 毫升用戶自備的 HANK 平衡鹽緩沖溶液或 PBS 緩沖溶液到細胞培養瓶，覆蓋培養瓶表面
4． 小心抽掉清洗液
5． 加入 2 毫升 染色工作液
6． 在 37℃培養箱孵育 10 分鐘，避免光照
7． 在熒光顯微鏡下觀察熒光細胞：激發波長 543nm，散發波長 598nm――顯示強烈桔紅色熒光細胞的為
脂類豐富的陽性細胞
注意事項
1． 本產品為 1 毫升（0.5 毫克/毫升）規格
2． 操作時須戴手套
3． 用戶可以參考本產品的操作步驟用于細胞分析
4． 本產品可用于識別、定量、以及動態觀察細胞脂類物質變化
5． 尼羅紅為通透性的染料，可以自由進入細胞
6． 根據細胞株的差異，可以適當調整染料劑量，以增強或降低熒光強度
7． 細胞培養液里避免使用脂類物質
8． 孵育時，必須避免光照
9． 使用時，避免污染母液
10．建議細胞染色完成后，即刻進行熒光檢測分析
11．熒光波長可以用激發波長 475nm，散發波長 580nm 替代
12．建議使用本公司的相關產品進行細菌或蛋白方面的尼羅紅染色分析
13．本公司提供系列尼羅紅檢測試劑產品
質量標準
1． 本產品經鑒定性能穩定
2． 本產品經鑒定熒光清晰