一、人骨橋素(OPN)ELISA試劑盒簡介

【檢測方法】：酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)

【產(chǎn)品性狀】：96T/48T，盒裝液體(兩種統(tǒng)一規(guī)格)

【貯藏條件】：2-8°C

【有 效 期】：二年，我公司Elisa試劑盒均為批次，可放心購買。

【主要成分】：酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準品等。

【種    屬】馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。

【產(chǎn)品單價】（ELISA試劑盒具體折扣），可免費代測，含稅含運費。

【標(biāo)    本】血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等

注：標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。

公司實驗室儀器設(shè)備清單：

酶 標(biāo) 儀：芬蘭（Labsystems Multiskan MS）

儀器型號：352型

洗 板 機：芬蘭（Thermo Labsystems）

儀器型號：AC8

離 心 機：微量高速離心機（國產(chǎn)）

儀器型號：TG16W

培 養(yǎng) 箱：隔水式恒溫培養(yǎng)箱（國產(chǎn)）

儀器型號：GNP-9080型

電鏡儀器：美國FEI公司臺式掃描電鏡Phenom

儀器型號：TY-HRC

實時定量PCR (RT-PCR): 羅氏

儀器型號：Lightcycler 480

免疫熒光：Modulus™

四、儲存及有效期 

于2～8℃避光保存，有效期為12個月。 

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。 

二、人骨橋素(OPN)ELISA試劑盒操作步驟 

（一）樣品準備 

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。 

2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋（如2μl血清加入198μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。 

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。 

（二）檢驗方法 

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。 

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。 

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。 

4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。 

5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。 

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。 

7.洗滌，同步驟5。 

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。 

9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。 

ELISA實驗在做到嚴格要求的同時有著一些不能忽視的小細節(jié)：

 1.用槍吸取液體時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確。

 2.液體全部加完后，可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。

 3.洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

 4.吸取液體時，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。

三、人骨橋素(OPN)ELISA試劑盒注意事項

1. 當(dāng)混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。

2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

3. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4. 請每次測定的同時做標(biāo)準曲線，做復(fù)孔。

5. 如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。

6. 在配制標(biāo)準品、檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。

7. 底物請避光保存。

8. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

四、ELISA試劑盒優(yōu)點：

我司共有14000余種ELISA試劑盒物種涵蓋Human,Mouse,Rat等，品種具備以下優(yōu)點：

*品質(zhì)—高品質(zhì)的抗體和試劑是ELISA試劑盒的基礎(chǔ)

精確特異—特異檢測目標(biāo)分子，結(jié)果精確可重復(fù)

高度靈敏—可檢測到pg/mL級別的目標(biāo)

種類齊全—可覆蓋人、大鼠、小鼠、棉鼠、獼猴、豬、馬、犬和貓等多個種屬

優(yōu)化設(shè)計—可拆卸式96孔板(12X8)，為血清、血漿、尿樣和細胞培養(yǎng)物樣本檢測進行優(yōu)化

五、人骨橋素(OPN)ELISA試劑盒結(jié)果計算：

在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準曲線。標(biāo)準品的濃度為X軸，相應(yīng)的OD值為Y軸，用四參數(shù)或?qū)?shù)-對數(shù)法繪制zui合適的標(biāo)準曲線。濃度與OD值成反比關(guān)系，隨著標(biāo)準品濃度的增加，黃色強度就減少，即OD值減少樣本濃度可直接從標(biāo)準曲線上讀取。如果樣本實驗前進行了稀釋，則試劑盒zui后結(jié)果應(yīng)乘以相應(yīng)的稀釋因子標(biāo)準曲線為逆向S型曲線。

附：采用全自動酶標(biāo)儀檢測，只需檢測前設(shè)置好酶標(biāo)儀的相關(guān)參數(shù)，如坐標(biāo)參數(shù)（線性，半對數(shù)）和計算方式參數(shù)（三次回歸、四參數(shù)或雙對數(shù)曲線方程），即可直接得到結(jié)果。

產(chǎn)品名稱存放：收到貨后貯存于4℃，強烈建議盡快使用配制的試劑1X緩沖液貯存于4℃，將不用的微孔板放回至密封袋內(nèi)密封起來，貯存于4℃，已稀釋的標(biāo)準品，生物標(biāo)記物，抗體和HRP貯存于4℃。

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