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：qiaoxing2013
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快速末端平齊化? 和快速連接試劑盒
#E0542S 20 次反應 ?1,769
#E0542L 100 次反應 ?7,059
■ 5 分鐘快速連接粘性末端或平末端
■ 室溫下即可進行連接反應
■ T/A 克隆
■ dsDNA 切刻修復
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本試劑盒在室溫（25℃）反應 5 分鐘，即可完成 DNA 粘性末端或平齊末端的連接反應。
– 快速 T4 DNA 連接酶（重組酶）
– 2X 快速連接反應緩沖液
132 mM Tris-HCl，20 mM MgCl2，2 mM DTT，2 mM ATP，15% 聚乙二醇（PEG 6000），pH 7.6 @
25℃。
該試劑盒經過嚴格的質量控制檢測，以確保酶的高純度和高效率。
用快速連接試劑盒能使大多數連接反應在 25℃ 條件下 5 分鐘甚至更短時間內達到反應終點，增加反應時間反應效率不會增強。事實上，連接 1 小時后轉化效率便會降低，如果 25℃ 反應過通宵，則轉化效率會下降到 75%。
電轉化可以使轉化效率提高幾個數量級。在用快速連接反應產物做電轉化前，一定要降低 PEG 濃度。推薦使用柱離心式 DNA 純化方法，或選擇電轉連接酶（NEB #M0369）。
快速連接進程曲線：LITMUS 28i 載體經 EcoRV 切割（平齊末端）或 HindⅢ切割（粘性末端）后，用小牛腸堿性磷酸酶（CIP）處理，膠回收純化。插入片段來自 φX174 DNA 的 HaeⅢ 消化產物（平齊末端）或 λDNA 的 HindⅢ 消化產物（粘性末端），插入片段和載體以 3:1 的比例，使用快速連接試劑盒進行連接。連接產物轉化入化學方法制備的大腸桿菌感受態細胞，在 LB-amp 平板上 37℃ 過通宵培養。
| 連接酶 | |||
| NEB# | 產品名稱 | 規格 | 單價 |
| M0202L | T4 DNA Ligase | 100,000 units | 3,029 |
| M0202M | T4 DNA Ligase, high conc. | 100,000 units | 3,029 |
| M0202S | T4 DNA Ligase | 20,000 units | 699 |
| M0202T | T4 DNA Ligase, high conc. | 20,000 units | 699 |
| M0202V | T4 DNA Ligase | 10,000 units | 349 |
| M2200L | Quick Ligation Kit | 150 rxns | 4,569 |
| M2200S | Quick Ligation Kit | 30 rxns | 1,009 |
| M2200V | Quick Ligation Kit | 15 rxns | 509 |
| M0367L | Blunt/TA Ligase Master Mix | 250 rxns | 4,569 |
| M0367S | Blunt/TA Ligase Master Mix | 50 rxns | 1,149 |
| M0370L | Instant Sticky-end Ligase Master Mix | 250 rxns | 4,569 |
| M0370S | Instant Sticky-end Ligase Master Mix | 50 rxns | 1,149 |
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