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DMEM高糖培養基基本成分和保存
無機鹽;培養液中無機鹽的主要功能是幫助細胞維持滲透壓平衡。此外,通過提供鈉,鉀和鈣離子,幫助細胞調節細胞膜功能。培養液的滲透壓是一個非常重要的因素, 細胞通常可耐受260mOsm/kg ~320 mOsm/kg。標準培養液的滲透壓在此范圍內波動。特別注意:向培養液中加入其它物質有可能會明顯改變培養液的滲透壓,特別是溶于強酸或強堿中的物質。向培養液中添加HEPES 時需按以下方法調節鈉離子濃度。
緩沖系統;大多數細胞所需pH值 在 7.2 - 7.4。但是,細胞培養zui適pH 值隨培養的細胞種類不同而不同。成纖維細胞喜歡較高pH值 (7.4 - 7.7), 而傳代轉化細胞系則需要偏酸pH 值(7.0 - 7.4)。
由于多數培養液靠碳酸氫鈉(NaHCO3)與CO2 體系進行緩沖,因此,氣相中的CO2 濃度應與培養液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養箱空氣中CO2濃度設定在5%,培養液中NaHCO3 的加入量為1.97g/L;如果CO2 濃度維持在10%,培養液中NaHCO3 的加入量為3.95g/L。
細胞培養瓶蓋不應擰得太緊,以保證氣體交換。HEPES 是一種非離子緩沖液,在pH 7.2 - 7.4 范圍內具有較好的緩沖能力,但是非常昂貴,在高濃度時對一些細胞可能有毒。HEPES 緩沖液可與低水平的碳酸鈉(0.34g/L)共用,以抵消因額外加入HEPES 引起的滲透壓增加。在這種培養條件下,細胞培養瓶的蓋子應擰緊,以防止培養液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數培養液中含有酚紅作為pH 指示劑,酸性培養液呈橙黃色,堿性培養液呈深紅色。
碳水化合物;碳水化合物是細胞生長主要能量來源,其中有的是合成蛋白質和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖、丙酮酸鈉和醋酸等。
維生素;在細胞培養中,盡管血清是維生素重要來源,但是許多培養基中添加了各種維生素以適合更多的細胞系生長。
液體培養基;應于4℃冰箱避光保存,實驗前放入37℃預熱。未加血清液體培養基有效期為12 個月。液體培養基中的L-谷氨酰胺會隨著儲存時間的延長而慢慢分解。如果細胞生長不良,可以再添加適量L-谷氨酰胺。
干粉培養基保存:
4℃冰箱避光保存,有效期36 個月。
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