培養箱在實驗室設備中的用途
培養箱在實驗室設備中的用途
細胞培養箱所需的實驗室設備的種類和使用建議,也有一定的標準和規范:細胞培養主要重點在于保持無菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。
1、顯微鏡:倒置式顯微鏡是細胞培養實驗室日常工作常規*設備,主要用于日常了解細胞的生長情況并觀察有無污染發生。如資金允許,建議選用配置有照相系統的高品質相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統或縮時電影拍攝裝置等,可隨時拍攝并記錄細胞生長情況。
超凈工作臺:目前絕大部分細胞實驗室使用超凈工作臺實現無菌操作,具有操作簡單、安裝方便、占用空間小且凈化效果很好。超凈工作臺主要有兩種——側流式(垂直式)和外流式(水平層流式)。工作原理一般是將室內空氣經粗過濾器初濾,由離心風機壓入靜壓箱,再經高效空氣過濾器精濾,由此送出的潔凈氣流以一定的均勻的斷面風速通過無菌區,從而形成無塵無菌的高潔凈度工作環境。
2、(1)側流式工作臺:空氣凈化后的氣流由左或右側通過工作臺面流向對側,也有從上向下或從下向上流向對側,形成氣流屏障保持工作區無菌,工作臺結構為封閉式;
(2)外流式工作臺:凈化后的空氣面向操作者流動,因而外方氣流不致混入操作,工作臺結構為開放式,但進行有害物質實驗操作對操作者不利。超凈工作臺應需要定期請有關部門檢查潔凈度,符合要求的超凈工作臺其潔凈度應達到100級,用塵埃粒子計數儀檢測粒徑≤5μm的塵埃粒子數量不應超過3.5個/L;空氣流量應控制在0.75-1.0m3/s;細菌菌落數平均<1個,根據無菌狀況必要時需要置換過濾器。
3、培養箱:體外培養的細胞和體內細胞一樣,需要在恒定的溫度下生存,一般適生長溫度為37℃,溫差變化不應超過±0.5℃。溫度升高2℃時,變不利于細胞生存,溫度達到40℃以上細胞將很快死亡。因此,可精確控溫的恒溫培養箱、CO2培養箱是選擇。
(1)恒溫培養箱:應選隔水式或晶體管式自控溫培養箱,此類培養箱靈敏度高,溫度控制較穩定。一般的恒溫培養箱價格較便宜,其缺點是只宜于作密閉式培養。
(2)CO2培養箱:目前多數的細胞培養室已廣泛使用。CO2培養箱的優點是能夠提供進行細胞培養時所需要的一定量的CO2(常用濃度為5%),易于穩定培養液pH,適用于開放或半開放培養。使用培養瓶時,為使培養瓶內與外界保持通氣狀態,可將瓶蓋略微旋松,為避免細胞被污染,使用這種培養方式時,培養箱內空氣必須保持清潔,需定期用紫外線照射或酒精消毒,同時培養箱內應放置盛有無菌蒸餾水的水槽,防止培養液蒸發,保持箱內相對濕度在100%。
(3)細胞培養耗材:培養細胞的器皿可用培養皿、培養板或培養瓶,萊貝在本篇不做詳細介紹,這部分知識會在實驗室耗材知識部分作重點介紹。
4、細胞冷凍儲存器:儲存器常用的液氮容器,根據使用需要分為不同類型和規格。選擇液氮容器時需要考慮三個因素:容積大小、取放使用方便、液氮揮發量。液氮容器的大小一般在25-500L,可以儲存1ml的安瓿250-15000個左右。液氮溫度低文帝可達-196℃,使用時應注意避免凍傷。由于液氮易揮發,需注意觀察剩余液氮量,及時補充,避免液氮不足使細胞受損或死亡。目前有許多智能型細胞冷凍儲存器可供選擇,可配置有電子控制器的液氮儲存器,實現凍存自動化;并可監測液氮水平和樣品溫度,確保樣品溫度始終處于設定溫度點;可配置報警系統,設置液氮液面、溫度、電池、電壓、電源等失常情況下報警;同時具備熱氣體旁路系統,防止高于-130℃的暖空氣進入液氮罐,從而更有效地保護樣品,防止容器內升溫。另外,可選擇液氮供應罐通過連接管給儲存罐補充液氮,保證樣品安全。