當前位置:東曹(上海)生物科技有限公司>>技術文章>>淺談凝膠滲透色譜儀的色譜柱安裝和使用
淺談凝膠滲透色譜儀的色譜柱安裝和使用
凝膠滲透色譜也稱為體積排阻色譜或尺寸排阻色譜,是液相色譜的一個分支,是高聚物表征的重要方法之一。凝膠滲透色譜是一個復雜的體系,需要考慮的問題很多。
凝膠滲透色譜儀的基本組成為六通閥、凈化柱、泵等;全自動型主要由樣品進樣和收集系統、泵、分離柱、溶劑及計算機控制系統等組成。
凝膠滲透色譜儀的分離原理與通常使用的柱層析的區別主要是:通常柱層析是利用填料、樣品和淋洗劑之間極性的差別來達到分離目的,而凝膠層析儀則是利用化合物中各組分分子大小不同而淋出順序先后也不同而達到分離目的的,淋洗溶劑的極性對分離的影響并不起決定作用;對于凈化含脂肪、色素較多的樣品具有明顯的優勢。
凝膠滲透色譜儀色譜柱的安裝和使用
1、在連接色譜柱之前,預先用即將使用的流動相體系置換以前用的流動相體系。
2、在連接色譜柱時,要趕走因色譜柱保存不當或長時間不用在色譜柱的進口或者出口處產生的一些氣泡。
3、連接色譜柱要注意標示的色譜柱進出口方向。
4、如果分析所用的溫度較高,應在較低的流速下比如0.2到0.3ml/min的流速下緩慢地升高溫度,當溫度達到設定溫度后,再慢慢地增大流速至設定值。
5、如果色譜柱需要較長的時間才能平衡穩定,檢查色譜柱連接處是否有漏液。
凝膠滲透色譜儀不但可以用于分離測定高聚物的相對分子質量和相對分子質量分布,同時根據所用凝膠填料不同,可分離脂溶性和水溶性物質,分離相對分子質量的范圍從幾百萬到100以下。近年來,凝膠色譜也廣泛用于小分子化合物。相對分子質量相近而化學結構不同的物質,不可能通過凝膠滲透色譜法達到*分離純化的目的。凝膠色譜不能分辨分子大小相近的化合物,相對分子質量相差需在10%以上才能得到分離。