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關鍵詞:蛋白酶k
上海乾思生物蛋白酶k品牌代理經營進口胎牛血清、細胞因子、ELISA試劑盒、細胞、抗體、生物試劑、耗材、培養(yǎng)基、一抗、二抗、其產品吸附均勻,吸附性好,空白值低,孔底透明度高,代做ELISA實驗等。完善的庫存及供應體系以及高效穩(wěn)定的純化技術,保證產品均能現貨供應和產品質量的穩(wěn)定性。
怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養(yǎng)條件?
ATCC(American Type Culture Collection)收集了絕大多數細胞的詳細資料。打開ATCC網頁的Cells and hybridomas鏈接,輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數據庫。數據庫中有每一種細胞的詳細描述,包括細胞的來源,培養(yǎng)和凍存條件,以及相關文獻等資料。
如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基?
培養(yǎng)某類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。MEM中培養(yǎng)的細胞,很可能在DMEM或M199中同樣容易生長。總之,*MEM、DMEM做貼壁細胞培養(yǎng);RPMI1640做懸浮細胞培養(yǎng);各種目的無血清培養(yǎng)*AIMV培養(yǎng)基(SFM)。
測序實驗流程:
1 收集樣品
2 相關試劑 總RNA提取試劑TREzol Reagent (RNA提取試劑), M-MLV(cDNA逆轉錄酶), RNA 純化試劑, RealqPCR MasterMix (熒光定量PCR預混試劑)。
3 實驗儀器 熒光定量PCR儀; PCR儀;低溫離心機。
4 總RNA提取
5 cDNA合成 在0.5ml的離心管中加入1µl模板總RNA(1µg/µl); 2µl隨機引物(T18, 10pmol/ul);2µl 10mM dNTP mix;加水至15µl體系。混勻后70℃變性RNA 5分鐘,冰上速冷1分鐘,離心將溶液收集至管底加入6µl 5×PCR buffer;1µl RNaseout;1µl M-MLV RT;加水至30µl體系。PCR儀中反應條件設置 37℃延伸60min,70℃保溫15min終止反應。合成好的cDNA置于 -20 ℃保存?zhèn)溆谩?br style="box-sizing: border-box; margin: 0px;" />6 引物設計與thermal cycler protocol thermal cycler protocol合成
7 實時定量PCR 按以下反應體系進行: 2x RealqPCR MasterMix(Modified DNA polymerase、SYBR Green I、Optimized PCR buffer、5mM MgCI2、dNTP mix including dUTP)25ul;上游引物F 1 ul,下游引物R 1 ul;cDNA template 2ul。定量PCR儀擴增反應條件設置:50 ℃ 2min ;95 ℃ 10min ;95℃ 15s --60 ℃ 60 s (40個循環(huán))。
8 PCR產物溶解曲線分析 將所擴增的PCR 產物進行溶解曲線分析,單峰溶解曲線表示擴增產物單一,無非特異性擴增產物。溶解曲線生成的反應程序為: 95 ℃ 15s , 60 ℃ 15 s , 95 ℃ 15s。
注意事項:收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定,對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃?zhèn)溆茫缬刑厥庠蛐枰芷谑占瘶吮荆瑢吮炯皶r分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融,標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月,-70度可保存6個月,部分標本需添加抑肽酶。
細胞出現問題,可重發(fā)的情況有哪些?判定標準是什么?
(1)細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、破損、漏液等,重發(fā);
(2)凍存的細胞復蘇后,絕大多數細胞未存活,重發(fā);
(3)存活的細胞靜置24小時后,絕大多數細胞未存活,重發(fā);
(4)凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封,出現污染,重發(fā);
(5)視具體情況而定。
細胞出現問題,不予以重發(fā)的情況有哪些?
(1)客戶造成細胞污染,不重發(fā);
(2)客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā);
(3)細胞狀態(tài)不好,未提供細胞培養(yǎng)前3天照片的,不重發(fā);
(4)細胞培養(yǎng)時經其它處理的,不重發(fā);
(5)細胞收到2天內,未告知,不重發(fā);
(6)視具體情況而定。
白介素2可溶性受體α鏈試劑盒 |
白介素2可溶性受體β鏈試劑盒 |
白介素-2受體(可溶性)試劑盒 |
白介素-2受體α(可溶性)試劑盒 |
白介素2受體試劑盒 |
白介素-3 ELISA KIT |
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白介素-4 ELISA KIT |
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白介素-5 ELISA KIT |
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白介素-6 ELISA KIT |
白介素-6受體(可溶性)ELISA KIT |
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白介素-7 ELISA KIT |
白介素7受體(可溶性)ELISA KIT |
白介素-8 ELISA KIT |
白介素8受體(可溶性)ELISA KIT |
白介素9 ELISA KIT |
白介素9受體(可溶性)ELISA KIT |
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