抗體:是高等動物在抗原物質的刺激下由漿細胞產生的一類能與相應抗原發生特異性結合的免疫球蛋白。抗體通常存在于血清合淋巴(組織液)中。
單克隆抗體及多克隆抗體:由單一克隆的細胞(通常是單一克隆的雜交瘤細胞)所產生的識別某一抗原表位的單一抗體;多克隆抗體是由多種細胞分別接觸相應抗原而產生的多種抗體的總和,多克隆抗體抗原識別抗原的多個表位。
抗體結構:抗體是由四條肽鏈構成的“Y”形對稱的分子,包括兩條重鏈和兩條輕鏈。在“Y”的部位的氨基酸順序在不同的抗體分子中差別很大,是負責與抗原進行特異性結合的區域,稱為可變區,余下的區域則稱為恒定區。
如何選擇二抗?
通常情況下,某一特定的實驗中可能同時有幾種二抗可供選擇,如何能選擇到該實驗的二抗,需要綜合以下幾個方面進行考慮:
一抗的物種來源
一抗是在什么物種來源的,相應的二抗也要是抗該物種的抗體。例如,如果一抗是在小鼠體內制備的,那么你就應當選擇抗小鼠的二抗,如果一抗是在兔體內制備的,那么二抗就應當是抗兔的抗體。至于二抗本身是在什么動物中制備的對二抗的質量并無明顯的影響。
一抗是屬于哪個類或亞類
二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白,因此相應的二抗就是抗IgG抗體.
單克隆抗體的類別及亞類通常會在產品列表中列出,如果你的一抗是小鼠IgM,那么相應的二抗就應當是抗小鼠IgM,或是抗小鼠IgG抗體。
如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合,或者你也可以選擇專門針對這一亞類的二抗,例如,如果你的一抗是小鼠IgG1,那么你可以選擇抗IgG1的二抗,此種抗體在雙標記實驗中尤其適合。
如果你不知道一抗是哪一類別或亞類,那么抗小鼠IgG是一個不錯的選擇,因為此種抗體可以識別大多數類型的IgG免疫球蛋白。