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詳細介紹
試劑的組成和配制：
酸性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；堿性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；試劑一：液體10 mL×1瓶，4℃保存；試劑二：液體3 mL×1瓶，4℃保存；試劑三：粉劑×1瓶，-20 ℃保存，用時加入3mL蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保存一周；試劑四：粉劑×1瓶，4 ℃保存，用時加入3mL蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保存一周；試劑五：液體3.6mL×1瓶，4 ℃保存；試劑六：液體30mL×1瓶，4 ℃保存；試劑七：液體50mL×1瓶，4 ℃保存。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
商品介紹：
測定意義： ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應，產(chǎn)生丙酮酸和CO2，以及伴隨NAD(P)+的還原反應，是蘋果酸代謝的關鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關。近年來植物ME活性測定較多，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。 測定原理： NAD-ME催化NAD+還原成NADH，在340nm下測定NADH增加速率。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 |
商品屬性：
產(chǎn)品名稱 | |
檢測方法 | 微量法 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 100管/96樣 |
產(chǎn)品貨號 | AS632121 |
NAD+和NADH的提取：
1、血清（漿）中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取：按照血清（漿）體積（ml）：酸性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建 議取約0.1ml血清（漿），加入1ml酸性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）； 冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中 和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 NADH的提取：按照血清（漿）體積（ml）：堿性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建 議取約0.1ml血清（漿），加入1ml堿性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）； 冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中 和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 | 2、組織中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：按照組織質(zhì)量（g）：酸性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1g 組織，加入1ml酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴 中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 NADH的提取：按照組織質(zhì)量（g）：堿性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1g 組織，加入1ml堿性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴 中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和， 混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 | 3、細胞或細菌中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：先收集細胞或細菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：酸性 提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml酸性提取液）， 超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次），95℃水浴5min （蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加 入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 NADH的提取：先收集細胞或細菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：堿 性提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1ml堿性提取液）， 超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次），95℃水浴5min （蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加 入500μl酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 |
ADH測定操作：
1. 分光光度計預熱30 min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A3和A4。△A測定管=A3-A4。
注意：空白管只需測定一次。
注意事項：
①加入試劑的順序應一致，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。
骨粘連蛋白(ON)英文名：ON ELISA Kitβ淀粉樣肽（1-28）抗體包裝5g
骨形成蛋白6(BMP-6)英文名：BMP-6 ELISA Kit有絲分裂激B抗體包裝5g
骨形成蛋白(BMPs)英文名：BMPs ELISA Kit軟骨蛋白聚糖抗體包裝25g
骨涎蛋白(BSP)英文名：BSP ELISA Kit去整合樣金屬蛋白10抗體包裝5g
骨退化特異標志物(CTX-2)英文名：CTX-2 ELISA Kit含錨蛋白重復序列-因子信號抑制物盒蛋白家族9抗體包裝100mg
骨特異性堿性磷B(ALP-B)英文名：ALP-B ELISA Kit含錨蛋白重復序列-因子信號抑制物盒蛋白家族8抗體包裝1ml
骨特性堿性磷(BALP)英文名：BALP ELISA Kit植物生長激ABP1抗體包裝25ml
骨橋(OPN)英文名：OPN ELISA Kit肌動蛋白相關蛋白1抗體包裝5ml
骨膠原交聯(lián)(Cr)英文名：Cr ELISA Kitα紅分化相關因子抗體包裝1g
骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)英文名：OT/BGP ELISA Kit血管緊張激活蛋白1抗體包裝5g
骨鈣(OT)英文名：OT ELISA KitAlpha清蛋白抗體包裝1g
骨鈣(BGP)英文名：BGP ELISA KitAFAP1L2抗體包裝1g
骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)英文名：BMPR-Ⅱ ELISA Kit神經(jīng)分化相關蛋白AHNAK抗體包裝5MG
骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)英文名：BMPR-1A ELISA Kit粘合連接相關蛋白1抗體包裝1g
骨成型蛋白9(BMP-9)英文名：BMP-9 ELISA Kit去整合樣金屬蛋白13抗體包裝5g
脊髓小腦共濟失調(diào)2型蛋白抗體轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)Fluticasone Propionate is a synthetic glucocorticoid, used to treat non-allergic
NAD蘋果酸酶（NADME）測試盒100管/96樣新疆溶桿 2-氨基異丁酸乙酯鹽酸鹽谷氧還蛋白1Elisa
黑木耳 2-基苯基酸1,3-酯谷氧還蛋白2Elisa
擬青霉 福沙吡坦骨保護Elisa
堅強芽孢桿 5-甲氧基-1H--3-甲酸甲酯骨成型蛋白2Elisa
皺環(huán)球蓋菇 1-N-Cbz-4-N-(Boc-氨甲基)骨成型蛋白4Elisa
米蘭鏈霉 3-氨基-2-基-6-溴吡骨成型蛋白6Elisa
規(guī)則東方喜鹽 芐基-2-乙骨成型蛋白7Elisa
枯草芽孢桿 3-溴-5-(三氟甲基)芐骨成型蛋白受體2Elisa
白酒 鉛 2-氨基-4,6-二-5-甲酰基嘧啶骨鈣Elisa
釀酒酵母 道古霉骨堿性磷酸Elisa
玫瑰淡紫鏈霉 對羥基乙酯骨堿性磷酸Elisa
黑色淺灰鏈霉 PD158780骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)Elisa
弗吉尼亞鏈霉 2,4-二甲基吡咯-3-羧酸骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)Elisa
鐮刀 4-溴-3-甲氧基甲酯骨橋Elisa
根瘤 (4-溴-2-基)甲骨特異性堿性磷酸Elisa
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