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詳細(xì)介紹
商品屬性：
產(chǎn)品名稱 | |
檢測方法 | 微量法 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 100管/96樣 |
產(chǎn)品貨號 | AS6321238 |
商品介紹：
測定意義： SDH（EC 1.1.1.14）催化山梨醇脫氫生成果糖，是調(diào)控生物體內(nèi)山梨醇含量的關(guān)健酶之一。 測定原理： SDH催化山梨醇脫氫生成果糖，同時還原NAD+生成NADH，測定340nm吸光度增加速率可以計算SDH活性。 需自備的儀器和用品： 紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制：
酸性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；堿性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；試劑一：液體10 mL×1瓶，4℃保存；試劑二：液體3 mL×1瓶，4℃保存；試劑三：粉劑×1瓶，-20 ℃保存，用時加入3mL蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保存一周；試劑四：粉劑×1瓶，4 ℃保存，用時加入3mL蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保存一周；試劑五：液體3.6mL×1瓶，4 ℃保存；試劑六：液體30mL×1瓶，4 ℃保存；試劑七：液體50mL×1瓶，4 ℃保存。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提取：
1、血清（漿）中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取：按照血清（漿）體積（ml）：酸性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建 議取約0.1ml血清（漿），加入1ml酸性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）； 冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中 和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 NADH的提取：按照血清（漿）體積（ml）：堿性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建 議取約0.1ml血清（漿），加入1ml堿性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）； 冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中 和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 | 2、組織中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：按照組織質(zhì)量（g）：酸性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1g 組織，加入1ml酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴 中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 NADH的提取：按照組織質(zhì)量（g）：堿性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1g 組織，加入1ml堿性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴 中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和， 混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：酸性 提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液）， 超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），95℃水浴5min （蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加 入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 NADH的提取：先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個）：堿 性提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液）， 超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），95℃水浴5min （蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加 入500μl酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測。 |
ADH測定操作：
1. 分光光度計預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測定吸光值變化，分別記錄15s和75s時吸光值，分別記為A3和A4。△A測定管=A3-A4。
注意：空白管只需測定一次。
注意事項：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。
姜黃（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Cefaclor蚓激抗體包裝5g
姜（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Cefradine瘦抗體包裝1g
降二氫辣椒堿英文名： Cefradine瘦受體抗體包裝25g
降香（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Ceftizoxime acid瘦受體抗體（長）包裝5g
膠蒼術(shù)甙，羧基蒼術(shù)苷二鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Ceftizoxime acid晚期包膜蛋白1抗體包裝1g
焦地黃乙甙A1英文名： OXYPEUCEDANINHYDRATE富含亮樣性核蛋白抗體包裝25g
焦地黃乙甙B1英文名： AG 490(Tyrphostin B42)晚期包膜蛋白2B抗體包裝5g
焦性沒食子（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Ganoderic acid F脂肪家庭成員K抗體包裝100ml
絞股藍(lán)（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Ursodeoxycholic acid白血病相關(guān)蛋白18/癌蛋白18抗體包裝500ml
絞股藍(lán)皂苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Ursodeoxycholic acid無腦回的致病基因LIS1抗體包裝100g
絞股藍(lán)皂苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名： Cefetamet pivoxil hydrochloride溶體相關(guān)膜蛋白3抗體包裝25g
絞股藍(lán)皂苷XLIX（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Cefetamet pivoxil hydrochloride亮腦啡肽抗體包裝1g
節(jié)裂角茴香（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： L-Biopterin自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體包裝5g
結(jié)石草（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名： Wortmannin指髕骨綜合征相關(guān)蛋白NPS1抗體包裝250mg
介芬英文名： Neostigmine bromide自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈β3抗體包裝100g
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥99.0%,標(biāo)準(zhǔn)品抗染色質(zhì)解旋DNA結(jié)合蛋白4試劑盒風(fēng)信子;2-(1-Ethoxyetho
致病性大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：純度> 99%抗染色體抗體試劑盒覆盆子;4-(4-Hydroxyphe
產(chǎn)黃青霉Penicillium│chrysogenum 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,BR抗縮試劑盒番瀉苷D;Sennoside D
山梨醇脫氫酶（SH）測試盒100管/96樣惡臭假單胞 2-氟半胱蛋白抑制劑;胱抑CElisa
桃色枝頂孢 4-氟天冬蛋白抑制劑Elisa
橘色硬皮馬勃 3-氟S1核酸Elisa
Escherichia 吲唑-3-羧酸刀豆AElisa
馬克斯克魯維酵母 2--4,6-二甲基嘧啶雌二Elisa
磚紅鐮孢 2-氟苯甲基溴孕酮Elisa
豬鏈球 2,4,5-三氟環(huán)腺苷二磷酸核糖Elisa
花蓋紅菇 5-氟脫鎂葉綠a氧化Elisa
膠質(zhì)肉座 (甲氧基)二苯基磷氧谷轉(zhuǎn)氨Elisa
根瘤 甲硫基乙酸乙酯葡聚糖Elisa
阪崎腸桿 2-氟羧甲基賴Elisa
細(xì)鏈格孢 2-環(huán)己基乙多聚半乳糖酸Elisa
木生假絲酵母 2,3-二氫-1,4-苯并二烷-5-羧酸二烯氧化物環(huán)化Elisa
釀酒酵母 3-(4-嗎啉)-1-l2一氧一植物二烯酸還原Elisa
Glaciihabitans 2-氟-6-髓過氧化物Elisa
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