產(chǎn)品名稱：植物維生素D3 ELISA試劑盒

英文名稱：Plant Vitamin D3,VD3 ELISA KIT

Elisa實驗前的準備
　　1仔細閱讀說明書
　　2確定試劑盒在有效期內(nèi)
　　3按說明書確定所有試劑齊全（數(shù)量、體積）
　　4標本制備要規(guī)范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者，注意低溫保存
　　5準備好所有實驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等
　　6根據(jù)檢測標本數(shù)量確定所需試劑的量
　　7按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑
　　DIY夾心法ELISA常見技術指南
　　8選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對；若選擇兩個單抗，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對。
　　9ELISA實驗中為了確定*信號和zui低背景應將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應包括在適當范圍內(nèi)的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進行操作。
　　10標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書，注意每批的細節(jié)。在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié)，將凍干的細胞因子復溶。
　　11一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標準的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。
　　12為了優(yōu)化靈敏度，建議隔夜孵育標準品和標本。
　　13若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
　　14當測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig.

實驗過程中加樣可能碰到的問題:
1、過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)；
2、手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間；
3、加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。.血清或血漿標本分離不好即進行加樣。
相應解決辦法：
1、標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
2、加樣后及時放入孵箱。
3、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4、如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5、標本較多時，請分批操作。 

   ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結果，認為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清流行病學調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法。

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