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恒遠產品文獻:E2免疫試劑盒
閱讀：835 發布時間：2019-9-6補腎更年方對去除卵巢大鼠血清 E2 水平及下丘腦 EＲα 蛋白表達的影響
張蘭1 邰迎春1 王淵2 侯淑紅1＊＊ 雷莉妍2
( 1． 陜西中醫藥大學附屬醫院，陜西 咸陽 712000; 2． 陜西中醫藥大學，陜西 咸陽 712046)
摘 要: 目的 治療補腎更年方對去除卵巢大鼠血清 E2 水平和下丘腦 EＲα 蛋白表達的影響，探討其效應機制。方法 將 40 只大鼠用手術去除卵巢后隨機分為補腎更年方大劑量組、中劑量組、小劑量組和己烯雌酚組，并與 10 只模型組和 10 只空白組做對照，補腎更年方大、中、小劑量組以不同劑量灌胃，模型組和空白組以生理鹽水灌胃，己烯雌酚組以己烯雌酚按 1mL/100g 的劑量灌胃，連續 45 d，結束后，取血，放免法檢測血清 E2，Westernblot 法檢測大鼠下丘腦 EＲα 蛋白表達。結果 與空白組比較，模型組大鼠血清 E2 水平顯著降低、下丘腦 EＲα 蛋白表達顯著減少( P ＜ 0． 01) ; 與模型組比較，補腎更年方大、中劑量組和己烯雌酚組能夠顯著升高大鼠血清 E2水平并增加下丘腦 EＲα 蛋白表達( P ＜ 0． 05) ，補腎更年方小劑量組對其無明顯影響( P ＞ 0． 05) 。
結論 補腎更年方在改善去除卵巢大鼠血清 E2 水平同時，可能通過影響 EＲα 蛋白的表達，提高 EＲ 的生物效應，從而發揮對更年期綜合征的治療效應。
關鍵詞: 去除卵巢大鼠; 補腎更年方; E2 ; EＲα
中圖分類號: Ｒ271． 11 + 2
文獻標識碼: A
更年期綜合征( menopausal syndrome，MPS) 是一種以植物神經功能紊亂為主要表現伴有神經心理癥狀的婦科常見癥候群，對婦女的工作、生活以及身心健康產生了較為嚴重的影響［1］。由于現代社會人們生活方式的改變、身心壓力的與日俱增以及人口老齡化結構的形成，本病發病率逐年上升且發病年齡較以往提前［2 － 3］。中醫學認為，腎虛為本病根本病機，有鑒于此，我們以滋陰降火為治法，自擬補腎更年方，在臨床取得了良好療效。本研究擬治療補腎更年方對去除卵巢所致更年期綜合征大鼠血清雌二醇( E2 ) 水平和下丘腦雌激素受體 α( EＲα) 蛋白表達的影響，以期進一步明確其作用機制。
1 材料和方法
1． 1 藥物與試劑 補腎更年方( 熟地黃 15 g，地骨皮 12 g，山藥 10 g，知母 10 g，黃柏 10 g，白芍15 g，酸棗仁 15 g，yin羊藿 10 g，炙甘草 6 g) ，中藥飲片由陜西中醫中醫藥大學附屬醫院中藥房提供; 己烯雌酚片( 規格: 0． 5 g /片) ，天津力生制藥股份有限公司，國藥準字 H12020154; 兔抗鼠 EＲα 蛋白抗體，兔抗鼠 GAPDH 抗體，Santa Cruz 公司; E2 免疫試劑盒，上海恒遠生物科技有限公司。
1． 2 實驗動物 SD 大鼠，雌性，2 ～ 3 月齡，體質量 250 ± 20g，西安交通大學動物實驗中心，動物合格證號: SCXK( 陜) 2016 － 015 號。
1． 3 主要儀器設備 離心機( 廣州儀科實驗室技術有限公司) ; 凝膠成像分析系統( BIO － ＲAD 公
司) ，Image － proplus 6． 0 圖像分析系統( Media Cybernetics 公司) ; γ － 911 全自動放免計數儀( 中國科技大學實業總公司) 。
1． 4 分組、模型組大鼠制備方法 將大鼠隨機分為空白組、模型組、西藥組、補腎更年方大劑量組、中劑量組、小劑量組共 6 組，每組 10 只。模型組大鼠即 去 除 卵 巢 大 鼠，采 用 10 % 水 合 氯 醛，以300 mg /kg的劑量通過腹腔注射將大鼠麻醉后，將其進行仰臥位固定，對其下腹部進行備皮消毒，切口部位定位于下腹部陰道口上方 2 cm 處，對此處進行正中切口，長度為 1cm，再將腹壁進行逐層切開，暴露雙側卵巢并在其下方進行結扎，將其切除，用青霉素對此部位進行沖洗，后將腹壁肌層和皮膚連續縫合［4］。
1． 5 空白組大鼠制備方法 即假手術組，麻醉、體位、切口、消毒、縫合同模型大鼠制備方法，但不切除卵巢，而是將卵巢周圍少量脂肪組織清除。
1． 6 各組干預方式 對于補腎更年方組，將補腎更年方各組成藥物，煎煮 濃 縮 成 湯 劑，大 劑 量 組 按1． 5mL/100g、中 劑 量 組 按 1mL/100g、小 劑 量 組 按0． 5mL/100g，對大鼠進行灌胃; 對于西藥組，將己烯雌酚片用蒸餾水制成含有己烯雌酚 0． 01 mg /mL 的溶液，按1mL/100g 的劑量對大鼠進行灌胃; 對于空白組和模型組，均在每日同一時段進行同種程度抓取，采用生理鹽水，按 1mL/100g 的劑量對大鼠進行灌胃。上述6 組均進行每日1 次的干預，連續治療45d。
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