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ELISA實驗中陰性、陽性和空白對照相互的作用
閱讀:6103 發(fā)布時間:2016-7-6ELISA實驗中,我們常常遇到導師跟我們講:關(guān)于試劑盒出現(xiàn)陰性、陽性和空白對照相對應的問題,陽性對照品(positive control)和陰性對照品(negative control)是檢驗試驗有效性的控制品,同時也作為判斷結(jié)果的對照,因此對照品,特別是陽性對照品的基本組成應盡量與檢測標本的組成相一致。本章上海恒遠生物技術(shù)探討將為大家具體推薦關(guān)于以上問題的解答。歡迎參考閱讀。
ELISA檢測,要求嚴格按照試劑說明書要求,每次試驗、每塊扳上都要設置以下3項對照和用途下面我司技術(shù)為您詳細介紹ELISA實驗設置陰性、陽性和空白對照的作用:
1.空白對照:僅用稀釋液代替檢測樣本、用以觀測zui終反應的顯色“本底"、并用于酶標儀消除、扣除“本底",即:以本底為“零"讀取陽性、陰性對照孔和樣本檢測孔的吸光值(A);或者,在計算陰性對照均值(NCx)、陽性對照均值(PCx)、樣本讀數(shù)的S/C.O.值時減去空白對照的本底吸光值。
2.陰性對照(品):所謂陰性對照(品),應當是本項檢測試驗中采用與待撿物(樣品、人用試劑就是人的血清等)具有同源性和同質(zhì)性,又不含有待檢物質(zhì),并能客觀比較和鑒別處理因素(血清免疫學試驗中有特異性抗原與抗體反應)之間的差異。
3.陽性對照(品):
(1)陽性對照(品)的概念與要求:同陰性對照(品),只是采用“精選"的含有待檢物質(zhì)的人血清制備而成。所謂“精選",就是把收集的陽性人血清經(jīng)過數(shù)種試驗進行“篩試"、把含有“干擾性物質(zhì)"的血清剔除、不用,以避免出現(xiàn)“假陽性"干擾試驗結(jié)果。
(2)陽性對照(品)設置,也可區(qū)分為兩種類型與用途:
一是陽性對照主要用于評價該項試驗結(jié)果是否有效和試驗結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性。而所設的陽性對照的測量值不列入Cutoff值計算、但是不可不做。如HBsAg、抗—HBs、HBeAg等。
二是陽性對照的設置,不僅用于評價試驗結(jié)果是否有效和試驗結(jié)果的穩(wěn)定性與可比性,而且計入Cutoff的計算。此時的Cutoff值的含義是代表該標志物在健康(正常)人群中正常值范圍的上限。待檢樣本檢測值超過該上限(Cutoff)時表示有診斷意義。