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酶聯免疫實驗操作流程詳解
閱讀：6766 發布時間：2018-12-6今天給大家講解下酶聯免疫實驗整個操作流程的詳細解析，精彩內容一起來看看吧！
實驗前準備：將樣本和試劑盒室溫平行1小時，如果樣本是凍存樣本，應提前拿到2-8攝氏度進行解凍（不建議直接室溫解凍）
自備材料：蒸餾水（去離子水）
操作流程：
1.將要進行實驗的版孔進行設定好，標準品5個點，每個點設定平行，需要用到10個孔，空白只需1個孔，剩下孔可以做為樣本孔。
2.稀釋標準：準備好5個EP管，然后在每個EP管中加入150微升標準稀釋液，編上編碼，分別為1，2，3，4,5，在1號管中加入150標準品，用槍頭反復吹打10次左右（注意控制幅度不要過大容易產生氣泡）如果有渦旋儀可以在渦旋儀上渦旋5秒左右，然后換槍頭，在1號管中取150微升加入到2號管，后面過程一次類推。zui后稀釋完，前面4個管中每管液體在150微升，5號管為300微升。濃度是從大到小。
3.標準、樣本、空白加樣：標準是每個濃度點2個孔（做平行），每孔加入50微升，加樣過程中注意換槍頭，樣本孔中每孔加入50微升，加樣過程中注意換槍頭，空白孔加入50微升標準稀釋液或者樣本稀釋液。特別要說明的是，標準加樣和樣本加樣盡量控制在15分鐘內加完，如果時間拖的太長，會導致前面孔先反應后面孔才開始反應，這樣數值偏差過大。加完樣后蓋上封板膜，至37攝氏度孵育30分鐘。
4.洗版：在孵育過程中可以將洗滌液配好，20ml30倍濃縮洗滌液用蒸餾水或者去離子水定容到600ml即可。每孔加入250-300微升的洗滌液（不要漫過版孔），（如果有震蕩儀的話，可以講板子放入震蕩儀上5秒左右，然后靜止三十秒，沒有請忽略次過程）將板子在桌子上晃動5秒左右，然后靜置30秒，甩干，拍板。說明：甩干過程盡量要快，1秒內就可以完成，不要慢慢傾斜倒掉液體，直接翻板甩掉液體即可。拍板過程需要在桌子上墊一層吸水紙或者濾紙，版孔朝下拍幾下，拍干區別主要看吸水紙和濾紙上沒有明顯的水漬為完成。
5.每孔加入50微升的酶標試劑，此處在空白孔中不需要加（空白孔為空），孵育30分鐘。
6.洗版同步驟4。
7.顯色，先每孔中加入50微升的顯色A液，然后每孔中加入50微升顯色B液。避光37攝氏度顯色15分鐘。
8.終止，每孔加入50微升的終止液，注意，加完終止液必須在15分鐘內讀數，超過時間讀數無效。在規定時間內讀數都是有效的。
9.至此，整個實驗結束
注意事項：
1.在做完整個實驗過儀器之前，儀器預熱半小時，這個計算好時間，也可以直接將儀器一直開著，直到整個實驗結束。
2.在加液過程中不要使槍頭觸及到板子底部，一般槍頭都懸空，可以將槍頭靠在孔邊緣，但槍頭尖懸空，如果槍頭上殘留液體看整體多少量，不要吹打下去。特別忌諱在版孔內壁流向版孔。整個加液過程不要產生氣泡。（洗滌液除外）
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