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如何選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的抗體呢?
閱讀:1507 發(fā)布時(shí)間:2018-8-2 八月悄無(wú)聲息的來(lái)了,八月的風(fēng),已經(jīng)不那么的輕柔,而帶有無(wú)言的煩躁,甚至裹著疼痛的雨。當(dāng)我們?cè)趯?shí)驗(yàn)時(shí),需要選擇的產(chǎn)品來(lái)確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確無(wú)誤,那在實(shí)驗(yàn)中,我們應(yīng)該如何正確的去選擇抗體呢?
抗體品種繁復(fù),品牌眾多,技術(shù)參數(shù)紛歧,價(jià)格和質(zhì)量更是相差甚大,怎么購(gòu)買(mǎi)到高質(zhì)量?jī)r(jià)格適宜的抗體,并地做出我們想要的成果,其中有許多細(xì)節(jié)需求留意。今天恒遠(yuǎn)就給大家支招。
一、一抗的挑選
1.斷定抗體的姓名,留意中英文姓名、它名、亞型等信息。
2.斷定您的試驗(yàn)類(lèi)型,Elisa,WB,IHC,ICC,仍是FACS。一般抗體的闡明書(shū)都會(huì)列出該抗體經(jīng)驗(yàn)證過(guò)適用于何種試驗(yàn)的類(lèi)型,假如抗體闡明書(shū)沒(méi)有提及的使用類(lèi)型,并不意味著該抗體不適用于此種剖析使用類(lèi)型,而僅是闡明尚未經(jīng)過(guò)此種試驗(yàn)驗(yàn)證,請(qǐng)依據(jù)闡明書(shū)列出的已驗(yàn)證的類(lèi)型來(lái)挑選適宜您試驗(yàn)的抗體。
3.斷定試驗(yàn)樣本的種屬,Human,Mouse,仍是Rat。一般抗體闡明書(shū)都列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)適用于何種物種試驗(yàn),請(qǐng)依據(jù)闡明書(shū)列出已驗(yàn)證的種屬來(lái)挑選適宜您試驗(yàn)的抗體。
4.樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)。了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于挑選zui適宜的抗體,待測(cè)樣本蛋白的結(jié)構(gòu)域和樣本在提取和處理過(guò)程中是否會(huì)變性,蛋白空間構(gòu)象的改動(dòng),會(huì)影響抗體的免疫親和反響。
5.單多克隆抗體的挑選。市面上的抗體仍是以多克隆抗體為主,一般單克隆抗體特異性強(qiáng),但親和力相對(duì)小,檢測(cè)抗原靈敏度相對(duì)就低;而多克隆抗體特異性稍弱,但抗體的親和力強(qiáng),靈敏度高,但易呈現(xiàn)非特異性染色(能夠經(jīng)過(guò)封閉等避免)。
二、二抗的挑選
1.種屬來(lái)歷。首要依據(jù)一抗種屬來(lái)歷來(lái)決議購(gòu)買(mǎi)二抗來(lái)歷,如一抗是小鼠來(lái)歷,那二抗就買(mǎi)抗小鼠的即可(羊、兔等均可)。
2.符號(hào)物的挑選。有HRP、Biotin、熒光素等符號(hào)物。一般SP三步法二抗挑選Biotin符號(hào)的二抗,以與后邊的SP結(jié)合反響,而免疫熒光染色就需求購(gòu)買(mǎi)不同熒光素符號(hào)的二抗,如羅丹明、FITC、Cy3等常用熒光素。
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