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1. 標本及采集、貯運因素
① 嚴重溶血：以HRP為標記的ELISA測定中，殘留在孔內的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性，催化底物顯色造成假陽性；
② 混有紅細胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內不易洗凈
③ 如有細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，也會產生假陽性反應；
④ 標本凝固不全，有時為了爭取時間快速檢測，常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清，使血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊，易造成假陽性結果；
⑤ 采血試管洗滌不*、反復使用易交叉污染
⑥ 塑料試管能吸附抗原物質 ，樣本久置在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。
血清標本宜在新鮮時檢測，嚴重溶血標本禁用。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG 聚合，使間接法的 試劑 本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結血清融解后，蛋白質局部濃縮，分布不均，應充分混勻并避免產生氣泡。混濁或有沉淀的血清標本應先離心或過濾，澄清后再檢測。反復凍融會使 抗體 效價跌落，所以測 抗體 的血清標本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。
 

2. 之操作技術的影響
① 應保證清潔，整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。從而提高檢測的特異性。并得到更準確、可靠的實驗結果。
② 合理安排檢測量，以免反應板過多造成洗板等待時間長。
③ 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
④ 用洗板機洗板時，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干：還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產生拖帶現象而導致“花板”的出現。
⑤ 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。
 

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